[发明专利]一种脂肪间充质干细胞培养上清凝胶及其制备方法

权利要求书

1.一种脂肪间充质干细胞培养上清凝胶的制备方法，其特征在于，所述脂肪间充质干细胞培养上清凝胶的制备方法，包括以下步骤：

步骤一，进行干细胞培养上清的制备：于不含血清的干细胞培养基中培养间充质干细胞；用乙酸乙酯溶液萃取纯化得到的无细胞上清液，得到乙酸乙酯提取液，再经过离心、过滤，冻干，即得干细胞培养上清，备用；

步骤二，进行生物活性玻璃体的制备：将硅凝胶、硝酸钠、磷酸三乙酯、四水硝酸钙和模板剂依次加入至盐酸水溶液中，置于50～60℃环境中，搅拌，得溶胶；将所述溶胶置于55～66℃环境中陈化，得湿凝胶；将所述湿凝胶置于100～120℃环境中干燥，得干凝胶；将所述干凝胶置于450～550℃环境中焙烧2～4h，得到半成品；将所述半成品经气流粉碎，即得纳米级的生物活性玻璃体，备用；

步骤三，进行植物精油的制备：依次称取薰衣草、迷迭香、花梨木和肉豆蔻在内的植物原料；将所述植物原料和所述添加剂置于萃取釜中，于35～60℃和5～30MPa的条件下，注入所述超临界二氧化碳溶剂萃取2～5h得到萃取液；将所述萃取液进行分离提纯处理，萃取液先进入第一级分离器中进行降温处理，再进入第二级分离器中去除二氧化碳，制得所述植物精油，并进行去味，备用；

步骤四，进行凝胶固化剂的制备：依次称取硅基骨架材料、填充剂、引发剂、pH调节剂和乙醇；将硅基骨架材料、填充剂、引发剂、pH调节剂和乙醇在反应釜中进行混溶，设置温度为250～350℃，压力为2～4Mpa，反应4～6h；反应结束后，加水稀释、过滤，滤液静置24～36h后，加入相应量表面活性剂，搅拌、过滤，即得凝胶固化剂，备用；

步骤五，按照质量份数依次称取干细胞培养上清、甲基纤维素、壳聚糖、生物活性玻璃体、透明质酸钠、植物精油、医用凡士林、凝胶固化剂、卡波姆以及灭菌蒸馏水；

步骤六，将制备得到的干细胞培养上清用灭菌蒸馏水溶解，依次加入甲基纤维素、壳聚糖、生物活性玻璃体、透明质酸钠、植物精油、医用凡士林、凝胶固化剂和卡波姆，搅拌混合均匀，即得干细胞培养上清凝胶。

2.如权利要求1所述的脂肪间充质干细胞培养上清凝胶的制备方法，其特征在于，步骤二中，所述硅凝胶、硝酸钠、磷酸三乙酯、四水硝酸钙和模板剂的质量比为：50～60份：15～20份：2～3份：15～25份。

3.如权利要求1所述的脂肪间充质干细胞培养上清凝胶的制备方法，其特征在于，步骤二中，所述模板剂为聚乙二醇400、吐温60和/或聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物中的任意一种。

4.如权利要求1所述的脂肪间充质干细胞培养上清凝胶的制备方法，其特征在于，步骤三中，所述添加剂为聚氧乙烯醚类化合物RO(CH₂CH₂O)_nH，聚合度n的取值为5～10。

5.如权利要求1所述的脂肪间充质干细胞培养上清凝胶的制备方法，其特征在于，步骤四中，所述硅基骨架材料为甲醇硅烷三醇，所述填充剂为羟基磷灰石、水合铝盐、氯化钾、氯化钠、三氯化铝、氯化钙、水性钛白粉中的任意一种或多种，所述引发剂为过硫酸钾，所述pH调节剂为氨水、碳酸钠、碳酸氢钠、氢氧化钠、氢氧化钙、氢氧化钾中的任意一种，所述表面活性剂为吐温60。

6.一种利用如权利要求1～5任意一项所述脂肪间充质干细胞培养上清凝胶的制备方法制备的脂肪间充质干细胞培养上清凝胶，其特征在于，所述脂肪间充质干细胞培养上清凝胶按照质量份数计，由干细胞培养上清30～50份、甲基纤维素20～30份、壳聚糖15～30份、生物活性玻璃体10～15份、透明质酸钠8～12份、植物精油6～10份、医用凡士林3～5份、凝胶固化剂2～4份、卡波姆0.1～0.5份以及灭菌蒸馏水余量组成。

7.如权利要求6所述脂肪间充质干细胞培养上清凝胶，其特征在于，所述植物精油由茶树精油、薰衣草精油、迷迭香精油、肉豆蔻精油、花梨木精油、肉桂精油、快乐鼠尾草精油、丁香精油、天竺葵精油、薄荷精油以及柠檬精油中的任意两种或多种复配而成。

8.如权利要求7所述脂肪间充质干细胞培养上清凝胶，其特征在于，所述灭菌蒸馏水包括重蒸水和/或三蒸水。