[发明专利]一种T2毒素半抗原、人工抗原的合成方法及其应用

说明书

本发明公开了一种T2毒素半抗原，该半抗原的分子结构如下所示：，本发明还公开了该半抗原、人工抗原和以此人工抗原制备抗体的方法，以及半抗原、抗体的用途。本发明制备的抗体特异性好、灵敏度高，与结构类似物交叉反应低。因此，本发明的抗原和制备的抗体可用于建立免疫学检测方法，从而用于快速检测食品中的T2毒素。

技术领域

本发明属于食品安全检测领域，具体涉及一种T2毒素半抗原、人工抗原的合成方法及其应用。

背景技术

T2毒素（T2）是由多种镰刀菌产生的一种霉菌毒素。主要污染小麦、大麦、玉米等粮食作物及其制品，对人类健康及畜牧业构成了较大危害。T-2毒素主要影响血液，肝脏，肾脏，胰腺肌肉及淋巴细胞的功能，T-2毒素中毒后的一般临床症状为厌食、呕吐、腹泻、生长停滞、繁殖和神经机能障碍等。目前对的检测方法多为仪器检测，如薄层色谱法、液相色谱法、液相色谱-质谱法、气相色谱-质谱法等。仪器检测法虽然具有较高的准确性，但是样品前处理繁琐、检测时间长、仪器价格昂贵，并且需要专业的操作人员，从而限制了该方法的广泛应用。酶联免疫吸附测定技术Enzyme-Linked Immunosorbent Assay(ELISA)，是将免疫技术与现代测试手段相结合而建立的一种超微量的测定方法，具有成本低、速度快、灵敏度高、仪器设备简单的特点，可以进行现场操作。适合大批量样品的快速分析。而免疫学检测方法的基础是高特异性、高亲和力的抗体的制备，而T2毒素作为小分子化合物，本身不具备免疫原性，因此，其半抗原的结构改造和全抗原合成是建立免疫速测技术的关键和难点之一。

发明内容

为了解决以上现有技术存在的问题，本发明的目的在于提供一种T2毒素半抗原、人工抗原的合成方法及其应用。

为了实现上述目的，本发明提供以下技术方案：

一种T2毒素半抗原，该半抗原的分子结构如下所示：

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进一步的，本发明所述T2毒素半抗原的制备方法，包括以下步骤：

（1）取5ml单口瓶，称取T2 毒素10mg、ZnCl₂ 2mg、γ-氨基丁酸3.2mg，加入二氯甲烷2ml，室温搅拌反应过夜；

（2）TLC检测反应完全后，加入5ml水，用5ml二氯甲烷萃取3次，无水硫酸钠干燥有机相后旋干有机相，即得到T2毒素半抗原。

一种T2毒素人工抗原，所述人工抗原由权利要求1所述的半抗原与载体蛋白偶联后制备而得。

进一步的，本发明所述T2毒素人工抗原的制备方法，包括以下步骤：

（1）取5mg权利要求1所述的半抗原、3.5 mg NHS、5 mg EDC溶于200μL DMF溶液中，反应2h；

（2）将20 mg载体蛋白溶于2mL的pH9.6缓冲溶液中，将步骤（1）的反应液滴加至载体蛋白溶液中，反应过夜，即得T2毒素人工抗原。

进一步的，本发明所述T2毒素人工抗原的制备方法，其特征在于，所述载体蛋白为BSA、OVA或KLH。

一种采用本发明所述的T2毒素人工抗原免疫小鼠制得的能与T2毒素发生特异性免疫反应的T2毒素抗体。

一种本发明所述的T2毒素抗体在检测食品中T2毒素残留量的应用。

有益效果：本发明提供了一种T2毒素半抗原、人工抗原的合成方法及其应用，使用该方法合成的半抗原制备的人工抗原，免疫小鼠后得到的单克隆抗体的检测限为2ng/mL。本发明制备的抗体特异性好、灵敏度高，与结构类似物交叉反应低。因此，本发明的抗原和制备的抗体可用于建立免疫学检测方法，从而用于快速检测食品中的T2毒素。

附图说明

图1 为T2半抗原的合成路线图。

具体实施方式