[发明专利]簇毛麦2VL染色体特异性RFLP-STS分子标记及其应用

说明书

本发明公开了一种簇毛麦2VL染色体特异性RFLP‑STS分子标记及其引物和用途，属于分子生物学和遗传育种科学技术领域。本申请通过对簇毛麦2VL染色体长臂RFLP探针BCD512的核苷酸序列进行分析，获得BCD512序列探针的SSR位点并在该位点两侧设计引物对，利用引物对从小麦及簇毛麦DNA中扩增出呈现簇毛麦特异性带型，并且与2VL长臂紧密连锁的核苷酸序列。该分子标记同时具有RFLP标记的染色体位点唯一性和确定性，以及SSR标记的高多态性和操作简便性，有利于加快簇毛麦2V染色体，尤其是小麦‑簇毛麦易位染色体材料所携带的优良性状向受体品种的转移与利用，提高新品种选育的效率，降低育种成本。

技术领域

本发明属于分子生物学和遗传育种科学技术领域，具体涉及一种簇毛麦2VL染色体特异性RFLP-STS分子标记及其引物和用途。

背景技术

RFLP标记具有如下特点：(1)无表型效应。(2)一般表现为共显性。(3)具有物种特异性，对于分析一个分离群体的不同来源的染色体片段具有重要价值。(4)标记范围遍及全基因组。(5)在不同的物种之间具有通用性。因此，在分子标记发展的初期，这种标记被广泛的使用。但RFLP也有其缺点，如所需的DNA要求量大(5-15μg)、纯度高；实验操作复杂，周期长；探针具有种属特异性，每一探针能检测的位点少；而且在检测中一般要用放射性同位素，对人和环境不安全。此外，RFLP的探针DNA克隆的制备与存放较麻烦，且探针必须是单拷贝的，否则，杂交结果不能显示清晰可辩的带型，表现为弥散状，不易进行观察分析。在分子标记技术飞速发展的今天，为弥补这种技术本身所带来的不足，而不断的采用一些新的手段来对这种技术进行更新，如现在越来越多的采用生物素来取代同位素来进行标记，但利用非同位素标记时，其灵敏度又较同位素标记低得多。因此，RFLP标记不适合于作物育种中的大群体的筛选。

基于PCR技术的分子标记的发展是现今分子生物学发展最为迅速的一个方向，同时也是以一种单一技术为主外加其他技术对分子生物学产生重大影响的一个技术领域。PCR技术具有快捷、简易、灵敏等优点，己被广泛地应用于分子克隆、DNA遗传疾病的基因诊断、法医学、系统分类学、遗传学和育种学等研究领域，在标记技术的发展上起了巨大的作用。

STS标记最早由Olson等于1989年提出的，是对由其特定引物序列所界定的一类标记的统称，目的是建立一张人类基因组统一的生物学界标。其基本原理是依据单拷贝的RFLP探针、微卫星序列等两端的序列，扩增基因组中与单拷贝序列同源的序列，电泳显示扩增产物多态性。STS标记最大优点是它所产生的信息非常可靠，而不像RAPD、AFLP和利用随机探针产生的RFLP存在某种模糊性。

STS标记必须具备以下条件：(1)所开发的STS标记需要采用PCR技术，而且最终的检测需要以PCR技术为基础；(2)染色体位点的唯一性和确定性，作为一种序列位点标签，STS标记最大的特点就是染色体位点的唯一性，能够专一性的检测到某个染色体或染色体组位点的变化，这也正是传统的RFLP标记转化成STS最大的优势所在；(3)能够实现快捷方便的检测；(4)标记扩增的稳定性。随着分子生物学技术的发展，STS标记开发的途径越来越广泛，可以将一些传统标记(RAPD、RFLP、SSR等)转化成STS标记，从而加速标记的利用。