[发明专利]新型冠状病毒检测试剂盒的制备方法

权利要求书

1.新型冠状病毒检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、将生物活性原材料包被于微孔板表面，生物活性原材料的浓度为50ng/mL，生物活性原材料包被完成后为冻干粉形式，生物活性原材料中包含10％的海藻糖；

S2、包被过程中抗原抗体磁微粒用量的确定，实验中取待测样本50μL/管，37℃温育30分钟，洗液冲洗后去上清；加入检测新型冠状病毒抗体酶50μL/管，37℃温育30分钟，洗液冲洗后去上清；

S3、阴阳性对照品的调试，具体为：采用多份阴性血清，加0.05％PC300，混合均匀配制成阴性对照品，采用抗体阳性原料，经60℃条件下1小时灭活，用稀释液做适当稀释(分别按1：50、1：100、1：200、1：400、1：800)，混合均匀配制成阳性对照品；

S4、确定检测新型冠状病毒抗体酶的用量，检测新型冠状病毒抗体酶采用混合酶，混合酶包括10份－15份的辣根过氧化物酶、6份－10份的荧光微球、6份－8份的链霉亲和4份－7份的素磁微粒，选取发光底物液，发光底物液包括A液和B液；

S5、辣根过氧化物酶的活化：将15-20mg/mL的辣根过氧化物酶溶液与20-40mg/mL的过碘酸钠溶液按体积比1：1-3混匀，并在3-7℃的温度下避光反应1-2小时，制得半成品溶液；将浓度为20-40μL/mL的乙二醇水溶液与半成品溶液按照1:1混合，并在常温下避光反应20-30min，完成活化；

S6、免疫反应的加入量确定，具体如下：采用两步夹心法定量检测人血清中的新型冠状病毒抗体，检测中参与反应的是包被重组新型冠状病毒抗原和酶标记重组新型冠状病毒抗原捕获样本中的新型冠状病毒抗体；

S7、免疫结合反应温度与时间的确定，具体如下：温度：由于抗体、抗原是有活性的生物物质，温度超过一定的范围就会失去活性，通过试验在较小的范围内选择最适宜的孵育温度；

S8、洗孔体积与洗孔次数的确定，具体为：先固定洗管3次，通过改变每次注液体积，观察洗管效果。

2.根据权利要求1所述的新型冠状病毒检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述在S1中，生物活性原材料为新型冠状病毒抗原生物活性原材料，新型冠状病毒抗原生物活性原材料包括合成多肽SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4；且4种合成多肽的质量比为1:1:1:1。

3.根据权利要求1所述的新型冠状病毒检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述在S2中，通过考察对比确定包被新型冠状病毒抗原的使用量。

4.根据权利要求1所述的新型冠状病毒检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述在S3中，阴性血清需要在60℃的温度下灭活1小时，然后再加0.05％的PC300。

5.根据权利要求1所述的新型冠状病毒检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述在S3中，将配制的产品对照品与国家参考品或经国家参考品标化的企业参考品同时进行检测，来判定阴性对照品和阳性对照品是否合格，要求配制的产品对照品应符合国家参考品或经国家参考品标化的企业参考品的检测标准。

6.根据权利要求1所述的新型冠状病毒检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述在S4中，确定检测新型冠状病毒抗体酶用量的步骤具体如下：新型冠状病毒抗原在免疫反应中与样本中的抗体结合，根据临床需要，检测酶的用量应能满足强阳性的检测，通过比较不同酶用量比例，阳性RLU/阴性RLU较高值为使用比例。

7.根据权利要求1所述的新型冠状病毒检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述在S4中，荧光微球的活化：先对荧光微球悬液进行离心处理，然后加入吗啉乙磺酸溶液进行超声处理，接着依次加入碳二亚胺和N－羟基硫代琥珀酰亚胺溶液混合均匀后再次离心处理，弃上清液，再用吗啉乙磺酸溶液重悬超声混匀。