[发明专利]一种纳米抗体及其应用

说明书

本发明公开了一种纳米抗体及其应用，所述纳米抗体具有如SEQ ID NO.1～3所示的CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列。本发明同时提供了编码所述单克隆抗体的核酸分子、含有所述核酸分子的表达载体和宿主细胞。本发明的纳米抗体具有较高的结合活性以及中和活性。

技术领域

本发明属于细胞免疫学、基因工程领域，涉及一种纳米抗体及其应用。

背景技术

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)是一种革兰阳性细菌，主要起源于环境和食物，可引发多种感染，例如脓疱病、中毒性休克综合症、肺炎、化脓性关节炎、心内膜炎和自身免疫性疾病(如红斑狼疮)(F.D.Lowy.Staphylococcus aureusinfections.N.Engl.J.Med.,1998,339(8):520-532.)。金黄色葡萄球菌特别是耐药菌株在医院感染的高发病率和高死亡率，给全世界的医疗保健造成了巨大负担。尽管引入了针对金黄色葡萄球菌的新抗生素，但耐药性的快速出现表明仍需要开发对细菌的进化适应不施加选择性压力的新型治疗方法来对抗金葡菌感染相关疾病。

金黄色葡萄球菌能够表达广泛的毒力因子，从而逃避宿主免疫反应，并引发多种疾病。金黄色葡萄球菌感染的发病机理取决于生产的表面蛋白能够调节细菌黏附于宿主组织，分泌的一系列细胞外毒素和酶能够破坏宿主细胞和组织，避开宿主的免疫防御，使细菌在宿主细胞中生长和扩散(M.E.Powers,J.Bubeck Wardenburg.Igniting the fire:Staphylococcus aureus virulence factors in the pathogenesis of sepsis.PLoSPathog.,2014,10(2):e1003871.)。外毒素是金黄色葡萄球菌在指数后期和早期静止期分泌到细胞外基质中的蛋白质，它们能参与组织渗透，使细菌入侵宿主，还能溶解细胞作用，从中获取必要的营养物质帮助细菌生长。金黄色葡萄球菌分泌的常见外毒素包括溶血素、白斑毒素、去角质毒素、肠毒素(Staphylococcal enterotoxin,SE)和中毒性休克综合征毒素-1(Toxic shock syndrome toxin-1，TSST-1)(C.Kong,H.Neoh,S.Nathan.TargetingStaphylococcus aureus Toxins:A Potential form of Anti-VirulenceTherapy.Toxins(Basel),2016,8(3).)。

SE可引起呕吐和腹泻，是食源性疾病的最常见原因之一。SE根据抗原异质性进行分型，目前已鉴定的SE有20多种(N.Balaban,A.Rasooly.Staphylococcalenterotoxins.Int.J.Food Microbiol.,2000,61(1):1-10.)。SE是启动T细胞活化和增殖的超抗原，其中葡萄球菌肠毒素B(Staphylococcal enterotoxin B,SEB)是研究最深多的SE之一，被美国疾病控制和预防中心列为B级生物战剂，使其成为开发抗毒素中和抗体的潜在靶标。SEB直接与抗原呈递细胞表面的主要组织相容性复合物II类分子(MHC II)和T细胞受体(TCR)特定Vβ区结合，导致单核/巨噬细胞和T淋巴细胞均过度活化。活化的宿主细胞会产生大量促炎性细胞因子和趋化因子，从而激活炎症和凝血反应，导致发热、低血压和休克等临床症状。

针对SEB目前没有批准的疫苗或者特定的药物治疗，目前的研究提出了多种治疗方法，包括小分子治疗剂，针对SEB的疫苗，以及SEB靶向单克隆抗体。基于抗体药物为核心的被动免疫治疗MRSA感染具有巨大的发展应用前景，将可成为“非抗生素”治疗MRSA感染和控制耐药性发展新的免疫防治手段。