[发明专利]一种刺齿凤尾蕨中的化合物及其提取分离纯化方法和应用

权利要求书

1.一种刺齿凤尾蕨中化合物的提取分离纯化方法，所述化合物结构式分别如下：

1)7β,9β-二羟基-15-酮-对映-贝壳杉烷-16-烯-19,6α-内酯的结构式：

2)5β,11β,12β-三羟基-15-酮-对映-贝壳杉烷-16-烯-19-羧酸的结构式：

3)11β-羟基-15-酮-对映-贝壳杉烷-16-烯-19-羧酸的结构式：

4)7α,11α-二羟基-15-氧-16-亚甲基-对映贝壳杉烷-19,6β-内酯的结构式：

5)9β-羟基-15-酮-对映-贝壳杉烷-16-烯-19-羧酸的结构式：

其特征在于，所述化合物的提取分离纯化方法为：

1)药材的提取与粗分离

采集刺齿凤尾蕨鲜药材74.15kg，经过自然干燥、粉碎，30～60目过筛，即得粗粉29.9kg，粗粉先用2倍/次95％工业甲醇常温浸渍提取，浸渍提取次数为5次，每次浸渍提取时间为5天，再用2倍90％甲醇常温浸渍提取一次，最后用醇常温浸渍提取一次，浸提液在55℃下进行减压浓缩至密度为1.06的浸膏，再用1.25倍温水稀释，稀释后用等体积的乙酸乙酯进行萃取，萃取完成后，将萃取液合并在55℃下进行减压浓缩，浓缩至密度为1.06的乙酸乙酯部位浸膏。

2)乙酸乙酯部位分离

取乙酸乙酯萃取后的浸膏，用等量的30～60目的聚酰胺拌样，采用MCI反相柱进行洗脱，首先用50％甲醇/水替换MCI柱中的溶剂，然后依次用50％-100％的甲醇/水系统进行梯度洗脱并分段，得到H部分，I部分及其他部分；

3)纯化

取H部分样品，用100～200目的等量硅胶拌样，干法装柱，依次用比例为20∶1、4∶1的二氯甲烷-乙酸乙酯与10∶1、9∶1、4∶1的二氯甲烷-甲醇进行梯度洗脱，将流分进行薄层检识，合并相同部位得到4个部分H-1、H-2、H-3、H-4，将H-1和H-2再次用硅胶柱色谱进行分离，均依次用比例为20∶1、10∶1的二氯甲烷-乙酸乙酯与20∶1、10∶1、5∶1的二氯甲烷-甲醇进行梯度洗脱，流分析出晶体，经重结晶纯化得到化合物7为7β,9β-二羟基-15-酮-对映-贝壳杉烷-16-烯-19,6α-内酯、化合物8为5β,11β,12β-三羟基-15-酮-对映-贝壳杉烷-16-烯-19-羧酸、化合物9为11β-羟基-15-酮-对映-贝壳杉烷-16-烯-19-羧酸；将H-3和H-4再次用硅胶柱色谱进行分离，均以比例为20∶1、15∶1、10：1的二氯甲烷-乙酸乙酯进行梯度洗脱、再用比例为20∶1、10∶1、8∶1、5∶1的二氯甲烷-甲醇系统进行洗脱，白色条状结晶化合物10为7α,11α-二羟基-15-氧-16-亚甲基-对映贝壳杉烷-19,6β-内酯、白色方晶化合物11为9β-羟基-15-酮-对映-贝壳杉烷-16-烯-19-羧酸；

取I部分样品，用100～200目等量的硅胶进行拌样，以比例为50∶1、30∶1、20∶1、10∶1、5∶1、1∶1的二氯甲烷-甲醇依次进行梯度洗脱，流分析出结晶，将结晶反复重结晶进行薄层检识，化合物9为11β-羟基-15-酮-对映-贝壳杉烷-16-烯-19-羧酸。

2.根据权利要求1所述提取分离纯化方法制备的化合物7、8、10和11在40μM浓度下在制备治疗人白血病、人肺癌、人肝癌、人乳腺癌、人结肠癌药物中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述药物可以加入药学上可接受的辅料制成药学上可接受的固体制剂或液体制剂。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述固体制剂为颗粒剂、胶囊剂、片剂、丸剂、散剂、冻干粉针剂。

5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述液体制剂为注射制剂、口服液。