[发明专利]一种表皮干细胞扩增培养基及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种表皮干细胞扩增培养基，包括基础培养基和添加在基础培养基的以下成分：胸腺肽α1、甘油磷脂酰胆碱、棉子糖、甘氨酸亚铁、辅酶Q10、维生素E、复合氨基酸。本发明提供的培养基，无需添加滋养细胞共培养，通过添加胸腺肽α1、甘油磷脂酰胆碱可显著提高表皮干细胞的增殖速率，提高培养获得的细胞数量。培养基中还添加棉子糖和甘氨酸亚铁，有助于表皮干细胞维持未分化的状态，保持细胞增殖活性，提高了细胞传代培养的效率。本本发明还提供了一种表皮干细胞扩增培养基的制备方法，过程简便，易于操作。本发明还提供了上述培养基在表皮干细胞扩增中的应用，实现了表皮干细胞在体外的大量扩增，在短时间内可收获大量表皮干细胞。

技术领域

本发明涉及干细胞领域，尤其涉及一种表皮干细胞扩增培养基及其制备方法和应用。

背景技术

皮肤是构成人体器官的最大器官，与外部环境直接接触，起到使人体免受包括有害微生物在内的多种有害因子和紫外线等外部刺激影响，有重要的保护膜作用，并且是对全身代谢所需的生化功能的维持必不可少的器官。在皮肤表皮中存在多种干细胞，其中表皮干细胞存在于皮肤最外侧的基底层中，是一类具有无限增殖能力，可增殖分化为表皮中各种功能细胞的细胞群。在表皮形成、表皮组织结构稳定和皮肤创伤愈合及各种皮肤疾病发生、发展过程中发挥重要作用。

随着生物学的发展，发现在受损皮肤和粘膜功能与结构的重建方面，表皮干细胞有着极其重要的作用。如在遗传性皮肤病的治疗中，要达到基因治疗目的，必须把目的基因导入表皮干细胞中，才能在患者整个机体皮肤中得到该基因的产物。在各种临床及科研应用中，均需要大量表皮干细胞，因此为了获得大量的表皮干细胞，表皮干细胞的体外扩增显得尤为重要。

现有表皮干细胞的体外扩增中存在诸多问题，如培养基成分复杂，需要滋养细胞共培养、稳定性差等，在临床应用中存在安全隐患，并且细胞增殖速度慢，短时间内无法获得足够数量的表皮干细胞等，细胞分化快，一般只能传代至P3-P5代，也限制了扩增得到的细胞数量。因此有必要对表皮干细胞的扩增培养基做出进一步改进，提供一种安全性高，稳定性好，可显著促进表皮干细胞扩增的培养基对表皮干细胞的临床应用显得尤为重要。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的之一在于提供一种表皮干细胞扩增培养基，成分明确安全，稳定性好，能显著提高表皮干细胞的增殖效率。

本发明的目的之二在于提供一种表皮干细胞扩增培养基的制备方法。

本发明的目的之三在于提供一种上述培养基在表皮干细胞扩增培养中的应用。

本发明的目的之一采用如下技术方案实现：

一种表皮干细胞扩增培养基，包括基础培养基和添加在基础培养基的以下成分：胸腺肽α1、甘油磷脂酰胆碱、棉子糖、甘氨酸亚铁、辅酶Q10、维生素E、复合氨基酸。

进一步地，各组分在培养基中终浓度为：胸腺肽α1 2.5-3.2μg/mL、甘油磷脂酰胆碱1.8-2.7μg/mL、棉子糖3.0-5.5ng/mL、甘氨酸亚铁10-15ng/mL、辅酶Q10 1.5-3ng/mL、维生素E12-18μg/mL、复合氨基酸5-8μg/mL。

进一步地，各组分在培养基中终浓度为：胸腺肽α1 2.8μg/mL、甘油磷脂酰胆碱2.4μg/mL、棉子糖3.2ng/mL、甘氨酸亚铁12.5ng/mL、辅酶Q10 2.5ng/mL、维生素E15μg/mL、复合氨基酸6μg/mL。

进一步地，所述基础培养基为RPMI1640。

进一步地，所述复合氨基酸为谷氨酸、精氨酸、色氨酸、赖氨酸中的一种或多种。

本发明的目的之二采用如下技术方案实现：

上述培养基的制备方法，包括以下步骤：向基础培养基中加入胸腺肽α1、甘油磷脂酰胆碱、棉子糖、甘氨酸亚铁、辅酶Q10、维生素E、复合氨基酸，搅拌均匀，过膜除菌即得。