[发明专利]一种烟叶处理复合生物制剂及鲜烟叶的处理方法

权利要求书

1.一种鲜烟叶的处理方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤(1)：将保藏编号为CGMCC NO.21313的微球菌(Micrococcaceae Pribram)ZY02的菌落接种至液体培养基中，于25-40℃，100-200r/min的摇床中培养6-36h，得到微球菌种子液，将微球菌种子液在4000r/min，4℃条件下低温离心，去除上清液，加入无菌水复溶，调节OD₆₀₀为2.0，得到微球菌种子；

步骤(2)：配制含有葡萄糖、蛋白胨、酵母粉和一水合柠檬酸的水溶液，调节pH并灭菌后，接种保藏编号为CGMCC NO.21544的葡糖酸醋杆菌(Gluconacetobacter sp.)ZT-01，恒温震荡培养一段时间，制得葡糖酸醋杆菌种子液；

步骤(3)：将烟末与去离子水按照质量比1:(2-20)混合，在30℃-100℃下提取0.5h-5h，过滤后取滤液加入可溶性淀粉和可溶性蛋白，混匀并灭菌，得到烟草发酵诱导培养基；

步骤(4)：将微球菌种子和烟草发酵诱导培养基按照体积比1:(50-1000)混合，在温度25-40℃、50-300r/min搅拌发酵1-5d，发酵后的烟草发酵诱导培养基离心后在冰水浴中超声破碎，然后低温离心，取上清液，得到ZY02生物制剂；

步骤(5)：将葡糖酸醋杆菌种子液和烟草发酵诱导培养基按照体积比1:(10-1000)混合，在温度25-40℃、50-300r/min下先搅拌发酵12-48h再静置12-72h，发酵后的烟草发酵诱导培养基离心后在冰水浴中超声破碎，然后低温离心，取上清液，得到ZT-01生物制剂；

步骤(6)：将ZY02生物制剂和ZT-01生物制剂根据体积比(1-10):(1-10)混合，得到复合生物制剂；

步骤(7)：在鲜烟叶烘烤前，根据复合生物制剂与鲜烟叶的体积质量比为1:(50-10000)将复合生物制剂以喷雾的方式添加至鲜烟叶中。

2.根据权利要求1所述的鲜烟叶的处理方法，其特征在于，所述步骤(1)具体如下：

将保藏编号为CGMCC NO.21313的微球菌(Micrococcaceae Pribram)ZY02的菌落接种至液体培养基中，于30℃，150r/min的摇床中培养12h，得到微球菌种子液，将微球菌种子液在4000r/min，4℃条件下低温离心20min，去除上清液，加入无菌水复溶，调节OD₆₀₀为2.0，得到微球菌种子。

3.根据权利要求1所述的鲜烟叶的处理方法，其特征在于，所述步骤(2)具体如下：

配制含有20g/L葡萄糖、5g/L蛋白胨、5g/L酵母粉、1g/L一水合柠檬酸的水溶液，调节pH至4.8-5，于121℃灭菌15min，接种保藏编号为CGMCC NO.21544的葡糖酸醋杆菌ZT-01后于25-40℃，100-200r/min的条件下恒温震荡培养12-48h，制得葡糖酸醋杆菌种子液。

4.根据权利要求1所述的鲜烟叶的处理方法，其特征在于，所述步骤(3)具体如下：

将烟末过筛，过筛后的烟末与去离子水按照质量比1:(2-20)混合，在30℃-100℃下提取0.5h-5h，过滤后取滤液按照10g/L的可溶性淀粉添加量和10g/L的可溶性蛋白添加量加入可溶性淀粉和可溶性蛋白，混匀并灭菌，得到烟草发酵诱导培养基。

5.根据权利要求1所述的鲜烟叶的处理方法，其特征在于，所述步骤(4)具体如下：

步骤(4-1)：将微球菌种子与烟草发酵诱导培养基按照体积比1:(50-1000)混合，在温度25-40℃、50-300r/min的条件下搅拌发酵1-5d；

步骤(4-2)：发酵后的烟草发酵诱导培养基离心后在冰水浴中超声破碎2-30min，功率为50-300W，超声后低温离心，取上清液，得到ZY02生物制剂。