[发明专利]大肠杆菌L-谷氨酸脱羧酶突变体的制备及应用有效
| 申请号： | 202110687582.5 | 申请日： | 2021-06-21 |
| 公开（公告）号： | CN113355312B | 公开（公告）日： | 2022-10-11 |
| 发明（设计）人： | 徐沙;石贵阳;李方迪;顾正华 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N9/88 | 分类号： | C12N9/88;C12N15/60;C12N15/70;C12N1/21;C12P13/00;C12R1/19 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 赵巧娜 |
| 地址： | 214000 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 大肠杆菌 谷氨酸 脱羧酶 突变体 制备 应用 | ||
1.大肠杆菌L-谷氨酸脱羧酶突变体，其特征在于，所述突变体以氨基酸序列如SEQ IDNO.2所示的L-谷氨酸脱羧酶为亲本，将亲本第125位甘氨酸突变为苯丙氨酸。
2.编码权利要求1所述大肠杆菌谷氨酸脱羧酶突变体的基因。
3.携带权利要求2所述基因的表达载体。
4.表达权利要求1所述突变体，或含有权利要求2所述基因的微生物细胞。
5.一种产大肠杆菌L-谷氨酸脱羧酶的方法，其特征在于，将权利要求4所述的微生物细胞在TB培养基中培养至OD600＝0.6～0.8，加入终浓度为0.3～0.6mmol/L的IPTG诱导10～13h，将细胞破碎后离心取上清，即得到大肠杆菌L-谷氨酸脱羧酶液。
6.一种生产γ-氨基丁酸的方法，其特征在于，利用权利要求1所述大肠杆菌L-谷氨酸脱羧酶突变体、或权利要求4所述微生物细胞水解L-谷氨酸生成γ-氨基丁酸。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，将权利要求4所述的微生物细胞在TB培养基中培养至OD600＝0.6～0.8，加入终浓度为0.3～0.6mmol/L的IPTG诱导10～13h，收集细胞；将细胞加入含有磷酸吡哆醛和L-谷氨酸的反应体系中。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，在每1～2h向反应体系中加入等量的L-谷氨酸，在35～40℃，搅拌转速50～100rpm下反应。
9.权利要求1所述大肠杆菌L-谷氨酸脱羧酶突变体，或权利要求2所述基因，或权利要求4所述微生物细胞在水解L-谷氨酸或生产γ-氨基丁酸中的应用。
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