[发明专利]抗CD123人源化单链抗体及其应用

说明书

本发明属于基因工程领域，具体涉及一种抗CD123人源化单链抗体及其应用。本发明的识别CD123抗原的单链抗体的轻链氨基酸序列如SEQ ID NO:1，SEQ ID NO:3，SEQ ID NO:5，SEQ ID NO:7所示，所述单链抗体的重链氨基酸序列如SEQ ID NO:2，SEQ ID NO:4，SEQ ID NO:6,SEQ ID NO:8所示。本发明提供了稳定适合的抗CD123人源化单链抗体(scFv)，其用于制备CAR结构，既保留了scFv的结合特异性和亲和力，又保证了CAR‑T在体内的的稳定性和安全性。在免疫细胞中表达后，不仅可以有效的清除表达CD123抗原的肿瘤靶细胞，而对阴性抗原(不表达CD123)的肿瘤细胞没有毒性作用；并且能够维持靶向CD123的CAR在病人细胞培养过程中的阳性率，在靶抗原刺激后能够长时间的进行增殖，能够用于肿瘤的靶向治疗。

技术领域

本发明属于基因工程领域，具体涉及一种抗CD123人源化单链抗体及其应用。

背景技术

CD123又称白介素3受体α链(IL-3Rα)高表达于白血病干细胞或白血病幼稚细胞，在正常造血干细胞不表达或者低表达，是白血病相关抗原也是急性髓性白血病的特异性抗原。急性髓性白血病(Acute myeloid leukemia，AML)是髓系造血干/祖细胞恶性疾病，以骨髓与外周血中原始和幼稚髓性细胞异常增生为主要特征多数病例病情急重，预后凶险，如不及时治疗常可危及生命；常规的诱导化疗虽然能够缓解AML但是最终并不能阻止AML的复发以及复发患者高的死亡率。然而AML的常规治疗已经50年未有改变，急需寻找新的改变。

CD123靶标的出现是AML治疗的新突破；由于CD123在AML高表达，理论上以CD123为靶标的免疫治疗具有更安全有效的治疗效果，国外也已经在进行以CD123为靶标的靶向药物的临床试验，但是功效均很有限并且仍有安全性问题的发生；因此筛选适合的靶向CD123的单链抗体是很有必要的。

单链抗体作为嵌合抗原受体(CAR)结构中重要的组成部分，其选择对CAR-T疗效起到至关重要的作用，目前用于治疗AML的CAR-T研究相对较少，CAR的稳定性和安全性仍需进一步改造研究，因此，筛选适合于组合CAR的靶向CD123的单链抗体也很有必要。

传统的鼠源抗体，因为鼠抗的异质性会引起人抗鼠抗体反应(Human anti-mouseantibody reaction，HAMA)，不管是单独应用，还是组合作为CAR的抗原识别区应用，均会在循环系统中被很快清除，失去疗效。因此，治疗用鼠源单抗需要进行人源化修饰以提高抗体的人源化程度、减弱HAMA。但是抗体的改造通常会导致抗体失去原有抗原结合活性，因此需要对影响抗原抗体结合的关键残基进行反复修改，而后通过大量抗原抗体结合特异性、亲和力检测，从而筛选得到具有活性的抗体序列。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种识别CD123抗原的人源化单链抗体，其可以有效地降低免疫原性，增强单链抗体或含单链抗体的药物组合或CAR-T细胞在体内的持续和安全性。

为实现上述目的，本发明的技术方案为：

设计一种识别CD123的人源化单链抗体，其特征在于，所述单链抗体的轻链氨基酸序列如SEQ ID NO:1，SEQ ID NO:3，SEQ ID NO:5，SEQ ID NO:7所示，所述单链抗体的重链氨基酸序列如SEQ ID NO:2，SEQ ID NO:4，SEQ ID NO:6,SEQ ID NO:8所示。

所述单链抗体的连接方式为VL-Linker-VH或VH-Linker-VL，其中Linker氨基酸序列为GSTSGSGKPGSGEGSTKG或GGGGSGGGGSGGGGS。

进一步，所述抗CD123单链抗体氨基酸序列如：SEQ ID NO:9，SEQ ID NO:10，SEQID NO:11，SEQ ID NO:12所示。