[发明专利]一种快速鉴定植物基因的方法

说明书

本发明提供了一种快速鉴定植物基因的方法，该方法包括以下步骤：S1、将待测植物样本置于容器中，加入磁珠和/或钢珠；S2、向所述容器中加入提取液，所述提取液为0.2～0.3mol/L的氢氧化钾或氢氧化钠溶液；S3、将容器放入打碎仪器中进行物理破碎，取上层液体，得到含有核酸的溶液；S4、使用2xTaq Mix、引物、超纯水以及提取模板进行PCR扩增，扩增产物在琼脂糖凝胶电泳中检测。通过本发明的方法，可以快速有效地进行植物基因鉴定，而且操作简单省时、成本低、安全无毒，并且使用范围广泛。

技术领域

本发明涉及植物基因鉴定技术领域，更具体地，涉及一种快速鉴定植物基因的方法。

背景技术

转基因植物，是利用基因工程和遗传工程技术将优良性状功能基因整合进入目标植物的基因组的一定位置，并得以表达，从而获得具有新的遗传性状的植物。这些外源转入的目的基因不仅能够再后代中稳定遗传，同时还可以使转基因植物产生新的农艺性状，如抗虫、耐除草剂、抗逆、抗病、改善作物营养品质等。转基因作物自商业化以来，带来了一系列的农业、经济和环境效益。随着生物科技的不断发展，社会需求的日新月异，对转基因植物的研究不断深入，为加速科研进程，需要对转基因植物进行快速准确的检测，以验证基因是否转入植物体内以及验证转基植株是否纯合。

基因组鉴定有赖于植物基因组的提取，目前植物提取基因组应用最多的方法是采用CTAB法。该方法在提取过程中应用到异丙醇或者异戊醇、酚氯仿等，以除去其中的多糖和蛋白质等杂质，得到较纯的核酸。但是酚或者酚氯仿有致癌作用，属于二类危化品；异丙醇也具有一定的毒副作用，对实验者的人生安全具有一定的影响。而且该方法操作复杂，提取过程耗时长，不能同时大批量提取样本DNA。应三轻甲基氨基甲烷(Tris)和乙二胺四乙酸(EDTA)等试剂提取，该方法在提取过程中需要加热，且操作过程较长；采用其他方法提取植物基因都存在一定的限制，如采用磁珠法，试剂耗材存在成本高，且提取要进行预处理；采用过柱法提取植物基因组，操作步骤繁琐，耗时长等问题。需要研发出一种可以用于快速、且无毒提取植物基因组，其产物可以用于基因鉴定，以提高植物基因鉴定速度。

发明内容

基于此，本发明提供了一种快速鉴定植物基因的方法，使用该方法可以实现基因快速鉴定，而且操作简单。

为了实现上述目的，本发明的技术方案如下：

一种快速鉴定植物基因的方法，包括以下步骤：

S1、将待测植物样本置于容器中，加入磁珠和/或钢珠；

S2、向所述容器中加入提取液，所述提取液为0.2～0.3mol/L的氢氧化钾或氢氧化钠溶液；

S3、将容器放入打碎仪器中进行物理破碎，取上层液体，得到含有核酸的溶液；

S4、使用2xTaq Mix、引物、超纯水以及提取模板进行PCR扩增，扩增产物在琼脂糖凝胶电泳中检测。

在一些实施方式中，所述提取液的体积与所述植物样本的面积比为200:1。

在一些实施方式中，步骤S3中，将容器放入打碎仪器中，以20～40Hz的频率进行打磨。

在一些实施方式中，步骤S3中，打磨时间为30～120s。

在一些实施方式中，所述提取液配制包括将固体氢氧化钾或氢氧化钠溶于超纯水中的步骤。

在一些实施方式中，所述提取液配制方法为：称取一定质量的氢氧化钾或氢氧化钠粉末于烧杯中，加入超纯水溶解，再引流到容量瓶中定容，使氢氧化钠或氢氧化钾浓度为0.2～0.3mol/L。

在一些实施方式中，所述提取液为氢氧化钾溶液，浓度为0.2mol/L。

在一些实施方式中，所述植物样本为剪切为1cm²的植物叶片。