[发明专利]ANK三肽及其应用

说明书

本发明公开了一种ANK三肽，其氨基酸序列为Ala‑Asn‑Lys。通过试验验证发现本发明的ANK三肽能够有效降低促炎因子mRNA表达水平，具有一定的医学价值，可用于开发预防和/或辅助治疗炎症性肠病的食品或药物。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及生物活性肽领域，特别涉及ANK三肽及其应用。

背景技术

克罗恩病(CD)和溃疡性结肠炎(UC)是最主要的两类炎症性肠病IBD，是世界范围内除心血管疾病外的严重性疾病之一，其发病率及流行率曲线随着时间的推移呈上升趋势。至今为止，IBD的发病机制尚不完全清楚，影响因素众多，如：环境因素，免疫反应因素，遗传因素，微生物因素等(Arora et al.,2015)。虽然IBD的治疗已经取得了很多进展，但它仍然是不治之症。临床上，UC的主要治疗方法是氨基水杨酸盐，严重的UC患者可使用短期的类固醇治疗，若以上治疗方式仍不能缓解UC的肠道炎症则对患者施用免疫调节剂和抗肿瘤坏死因子α(anti-TNFα)抑制剂以缓解其肠道炎症。氨基水杨酸盐在CD中几乎无效，对于远端回肠、回盲肠或右侧结肠疾病的患者，可以使用肠溶布地奈德诱导缓解，严重的CD患者可使用泼尼松龙缓解肠道炎症。若以上治疗方式仍不能缓解CD患者的肠道炎症则对其施用anti-TNFα抑制剂，但大约30％的患者使用抗anti-TNFα无效。在对抗肿瘤坏死因子α抑制剂有效的患者中，每年也有高达10％的患者对该药物失去反应。此外，目前的IBD药物伴随着严重的副作用，包括丧失免疫耐受性和耐药性、感染并发症、内分泌损伤、肾脏肝脏损伤(Nielsen,Bjerrum,Herfarth,Rogler,2013；Poitras,Gougeon,Binn,Bouin,2008)。目前的治疗方案疗效低，不良反应升高是临床治疗主要关注的问题。因此，寻求新的具有抗炎活性的食源性天然产物作为治疗IBD的替代药物或营养补充剂成为了研究者关注的重点。

研究表明，RPIV能够抑制TNF-α诱导Caco-2细胞IL-8的分泌，并抑制NF-κB、MAPK信号通路中磷酸化蛋白的表达。CR，FL，HC，LL和MK显著抑制TNF-α诱导de Caco-2细胞促炎细胞因子mRNA的表达，上调抑炎因子IL-10的表达。PAY有效抑制LPS诱导的RAW264.7细胞NO和COX-2的分泌。VPY显著抑制IL-8和TNF-α的分泌。

发明内容

本发明的目的是解决现有技术的不足，提供一种ANK三肽，其氨基酸序列为Ala-Asn-Lys，分子量为331Da。该ANK三肽通过固相合成法获得，能够有效预防并缓解炎症性肠病，可以应用在制备预防和/或缓解炎症性肠病的食品或药物中。

本发明的另一目的是提供一种药物组合物，其活性成分包括ANK三肽，用于预防和/或缓解炎症性肠病。该药物组合物还可以包括溶剂或可药用辅助剂。

本发明采用TNF-α诱导人肠上皮细胞(HT-29)体外炎症模型来研究在2、4、8、16mM的浓度该三肽的抗炎活性。测定典型细胞因子IL-8的含量，同时运用WST-1试剂盒测定细胞活力。本发明采用RT-PCR结合Western-blot，验证其抗炎作用机制。本发明采用DSS诱导Balb/c小鼠急性结肠炎模型，研究该三肽在体内的抗炎活性。

本发明的有益效果为：本发明提供了一种ANK三肽，通过试验验证发现本发明的ANK三肽能够有效降低促炎因子mRNA表达水平，具有一定的医学价值，可用于开发预防和/或辅助治疗炎症性肠病的食品或药物。

附图说明

图1所示为ANK对TNF-α诱导的HT-29细胞IL-8的分泌影响及其对细胞活力的影响情况图；

图2所示为ANK对TNF-α诱导的HT-29细胞因子mRNA表达水平的影响情况图；

图3所示为ANK对TNF-α诱导的HT-29细胞NF-κB通路中关键蛋白表达水平的影响情况图；