[发明专利]一种超敏ECL发光液试剂及其使用方法

说明书

本发明公开了一种超敏ECL发光液试剂及其使用方法，其中，包含试剂液A、试剂液B，试剂液A包含三羟甲基氨基甲烷、鲁米诺、对羟基肉桂酸，试剂液B包含三羟甲基氨基甲烷、过氧化氢，使用时将试剂液A与试剂液B按比例混合，试剂A中的三羟甲基氨基甲烷的质量体积比为12g/L，鲁米诺的质量体积比为100mg/L，对羟基肉桂酸的质量体积比为0.21g/L；试剂B中的三羟甲基氨基甲烷的质量体积比为12g/L，过氧化氢的体积比为750μL/L；灵敏度较高，能够将蛋白含量为纳克级别的蛋白显出条带；无需发光显色前孵育；显色固相载体背景较为干净，无其它杂点，解决一些蛋白表达量较低或抗体与蛋白结合能力较弱的蛋白显色问题。

技术领域

本发明涉及分子生物领域，具体涉及一种超敏ECL发光液试剂及其使用方法。

背景技术

Western Blot实验即蛋白质印迹实验，它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法，其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过程的细胞或生物组织样品进行着色，通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情况的信息的一种方法。该方法可分为电泳、转印、酶免疫检测3个阶段，采用PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)分离的蛋白质样品被转移到固相载体(例如硝酸纤维素膜)上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能够保持电泳分离的多肽类型及其生物活性不变，以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶标记的第二抗体起反应，经过底物显色以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分；

目前在Western Blot实验中一般采用的发光显色液为ECL发光液，然而对于一些表达量较少的蛋白，其灵敏度相对较低或几乎没用，导致一些蛋白含量较低的蛋白无法被显色出来。而目前对于这一类的蛋白的显色问题还未得到解决。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种超敏ECL发光液试剂，还提供一种超敏ECL发光液试剂的使用方法，显色速度较快，能够节省大量的时间；灵敏度较高，能够将蛋白含量为纳克级别的蛋白显出条带；无需发光显色前孵育；显色固相载体背景较为干净，无其它杂点，解决一些蛋白表达量较低或抗体与蛋白结合能力较弱的蛋白显色问题，用以解决现有技术导致的缺陷。

为解决上述技术问题本发明提供以下的技术方案：

第一方面，一种超敏ECL发光液试剂，其中，包含试剂液A、试剂液B，所述试剂液A包含三羟甲基氨基甲烷、鲁米诺、对羟基肉桂酸，试剂液B包含三羟甲基氨基甲烷、过氧化氢，使用时将所述试剂液A与所述试剂液B按比例混合。

上述的一种超敏ECL发光液试剂，其中，使用时将所述试剂液A与所述试剂液B按1:1的体积混合。

上述的一种超敏ECL发光液试剂，其中，所述试剂A中的所述三羟甲基氨基甲烷的质量体积比为12g/L，所述鲁米诺的质量体积比为100mg/L，所述对羟基肉桂酸的质量体积比为0.21g/L。

上述的一种超敏ECL发光液试剂，其中，所述试剂B中的所述三羟甲基氨基甲烷的质量体积比为12g/L，所述过氧化氢的体积比为750μL/L。

上述的一种超敏ECL发光液试剂是基于一种Western Blot的超敏ECL发光液试剂，该超敏ECL发光液试剂能够快速进行显色，无需对固相载体进行孵育，能够缩短Westernblot蛋白的显色时间，同时，该超敏ECL发光液试剂显色之后，固相载体背景较为清晰，无其他雪花点或杂背景，解决一些蛋白表达量较低或抗体与蛋白结合能力较弱的蛋白显色问题。

第二方面，一种超敏ECL发光液试剂的使用方法，其中，包含以下步骤：

步骤1:将试剂液A与试剂液B按比例混合制成混合溶剂；

步骤2:将混合溶剂加载固相载体上，无需孵育。