[发明专利]一种稳定同位素氨基化合物标记试剂及其合成方法与应用

权利要求书

1.一种稳定同位素氨基化合物标记试剂，其化学结构式如式1：

其中：X＝D，所述R为F、Cl、Br、I元素中的任意一种。

2.根据权利要求1所述的稳定同位素氨基化合物标记试剂，其特征在于，所述R为Cl元素。

3.根据权利要求1所述的稳定同位素氨基化合物标记试剂，其特征在于，所述n＝2或3。

4.稳定同位素氨基化合物标记试剂的合成方法，包括步骤：

(1)提供中间体I：[d₅]-N-苯基邻氨基苯甲酸；

(2)中间体II的合成：将所述中间体I溶解于浓硫酸，加热反应后冷却，将冷得到的却液倒入沸水中，分离出析出的固体产物，洗涤该固体产物后干燥，得中间体II；

(3)中间体III的合成：将中间体II、碳酸乙烯酯溶解到二甲基亚砜中，然后加入痕量氢氧化钾，加热反应后冷却，将得到的冷却液倒入食盐水溶液中，分离出析出的固体产物，洗涤该固体产物后干燥，然后重结晶，得中间体III；

(4)冷却条件下，在溶解有固体光气的溶液中滴加三乙胺；然后加入溶解有所述中间体III的溶液，反应结束后分离出固体产物，即得所述稳定同位素氨基化合物标记试剂。

5.根据权利要求4所述的稳定同位素氨基化合物标记试剂的合成方法，其特征在于，步骤(1)中，所述中间体I的合成包括步骤：

(i)将邻氨基苯甲酸、铜粉和碳酸钾溶解到二甲基亚砜中，混合均匀后加入氘代溴苯-d₅，然后加热反应，结束后过滤反应液，收集滤液；

(ii)将滤液倒入水中，用浓盐酸调至pH值5～6，将析出的固体过滤并干燥，即得中间体I。

6.根据权利要求5所述的稳定同位素氨基化合物标记试剂的合成方法，其特征在于，步骤(i)中，所述邻氨基苯甲酸与氘代溴苯-d₅的摩尔比为1～1.5:1；

或者，所述铜粉添加量为邻氨基苯甲酸与氘代溴苯-d₅总摩尔量的0.05～0.1倍；

或者，所述碳酸钾添加量为邻氨基苯甲酸与氘代溴苯-d₅总摩尔量的1.1～1.5倍；

优选地，步骤(i)中，所述加热反应采用油浴加热，加热温度为145～150℃；

或者，步骤(2)中，所述加热反应温度为95～100℃，反应时间1.5～2.5h。

7.根据权利要求4所述的稳定同位素氨基化合物标记试剂的合成方法，其特征在于，步骤(3)中，所述中间体II与碳酸乙烯酯摩尔比为1:1.2～1.5；

或者，步骤(3)中，所述加热反应采用油浴加热，加热温度为140～150℃，反应时间为5～6.5h；

或者，步骤(3)中，用乙腈重结晶得淡黄色晶体，即中间体III。

8.根据权利要求4所述的稳定同位素氨基化合物标记试剂的合成方法，其特征在于，步骤(4)中，将固体光气溶解于二氯甲烷中，即得溶解有固体光气的溶液；

或者，步骤(4)中，所述三乙胺的加入量为固体光气质量的2.7～3.5％；

或者，步骤(4)中，所述中间体III与固体光气的摩尔比为1:1.8～2.3；

或者，步骤(4)中，所述反应先在冰浴中进行4h，然后升到室温继续反应5小时，反应结束后对反应液进行抽滤，滤液用旋转蒸发仪减压蒸干，并用乙腈重结晶，即得所述标记试剂。

9.权利要求1-3任一项所述的稳定同位素氨基化合物标记试剂和/或权利要求4-8任一项所述的合成方法得到的稳定同位素氨基化合物标记试剂在生命分析、环境分析、食品分析领域中的应用，优选为用于检测待测物中生物胺浓度。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述检测待测物中生物胺的浓度的方法包括步骤：

S1：配制硼砂/硼酸缓冲溶液(优选为pH＝9.5)、配制[d₀]-2-(9-吖啶酮)乙基氯甲酸酯的乙腈溶液作为轻型标记试剂溶液、配制[d₄]-2-(9-吖啶酮)乙基氯甲酸酯的乙腈溶液作为重型标记试剂溶液；

S2：依次将所述硼砂/硼酸缓冲溶液、含有生物胺的待测样品、轻型标记试剂溶液混合后反应，得反应液a；

S3：依次将所述硼砂/硼酸缓冲溶液、含有生物胺的待测样品、重型标记试剂溶液混合后反应，得反应液b；

S4：将所述反应液a和反应液b等体积混合，然后采用HPLC-MS/MS分析：轻型标记试剂衍生后所得轻型衍生物的峰面积表示为A1，生物胺的浓度表示为C1；重型标记试剂衍生后所得重型衍生物的峰面积记为A2，生物胺的浓度表示为C2，则根据公式C1/C2＝A1/A2，即可求得样品中生物胺的浓度。