[发明专利]用于EB病毒抗体快速联合检测的试剂盒

说明书

本申请涉及体外诊断免疫分析技术及纳米技术领域，具体为一种用于EB病毒抗体快速联合检测的试剂盒；所述试剂盒包括:EB病毒抗体标志物联合检测试剂卡、样本稀释液和固体底物试剂；本发明提供了一种快速现场检测EB病毒抗体的产品，解决了现有技术中不能快速高灵敏现场检测EB病毒抗体的不足，且可实现多指标联合检测；本申请中的试剂盒与传统ELISA试剂盒相比，灵敏度相当或更优，简单快速便携，16min内即可完成，无需大型精密仪器，稳定性良好，可常温保存及运输，具有广阔的应用前景。

技术领域

本发明涉及体外诊断免疫分析技术及纳米技术领域，具体为一种用于EB病毒抗体快速 联合检测的试剂盒。

背景技术

鼻咽癌(Nasopharyngeal carcinoma,NPC)是一类发生于鼻咽粘膜处上皮性质的恶性肿瘤。 早期鼻咽癌对放射治疗敏感，及时干预治疗临床治愈率可达90％以上；中期鼻咽癌生存率 可达80％；而晚期鼻咽癌易发生转移，致死率高，五年生存率低于20％。因此，早发现， 早治疗对于提高鼻咽癌患者治愈率，延长患者生存期具有重要意义。然而，由于鼻咽癌早 期症状不明显，易漏诊，约80％鼻咽癌患者在就诊时已发展至中晚期，延误了最佳治疗时 机。在高风险地区(如广西、广东中山等地)推行鼻咽癌筛查，有助于及早发现鼻咽癌高 风险人群，并进行追踪随访及干预，提高鼻炎癌早诊率。

经流行病学研究发现，约95％以上的鼻咽癌与EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)感染 密切相关。EB病毒是一种γ疱疹DNA病毒，也称为嗜淋巴细胞病毒，其感染还可能引起单核细胞增多症、恶性淋巴瘤等。在鼻咽癌患者的肿瘤活检组织中可检出EBV核酸或抗原[2](Liu Y等，Genet Test Mol Biomarkers，2011)，患者血清中亦存在针对EBV病毒抗原的特异性抗体。EBV感染后，机体会产生针对EB病毒多种抗原的免疫反应，产生多种EB 病毒抗体，包括EBV衣壳抗原抗体(EBV-VCA-IgG/IgA/IgM)，EBV早期抗原抗体 (EBV-EA-IgA)，EBV核抗原抗体(EBV-NA-IgG/IgA)、Rta蛋白抗体(Rta-IgG)及Zta 蛋白抗体(Zta-IgG)等[3](Li,Y.Q.等，Cancer Biol Med,2018)。不同抗体出现在病毒感 染的不同阶段，其滴度的动态变化和监测，可用于鼻咽癌早期筛查、临床诊断、治疗效果 及预后判断[4](鼻咽癌标志物专家委员会，鼻咽癌标志物临床应用专家共识，中国癌症防 治杂志，2019)。尽管90％以上的成人均为EB病毒感染者，然而大规模人群普查及跟踪随 访发现，仅鼻咽癌患者在出现临床症状前三年，表现出血清中多种IgA抗体显著升高[5,6](Ji, M.F.等，BritishJ Cancer，2007；季明芳等，中华肿瘤杂志，2003)。EB病毒IgA抗体水平 持续升高预示鼻咽癌发病高风险，其中，VCA-IgA 5年随访升高组风险调整比21.3％，且抗 体滴度与发病风险存在剂量-反应关系[7](Cao SM.,等，PLoS One,2011)。因此，基于 EBV-IgA等抗体的滴度检测和动态监测，可初筛罹患鼻咽癌高风险人群，进一步开展3-5 年的持续跟踪监测及风险管理，有助于在早期阶段筛查并发现鼻咽癌患者；同时可作为鼻 咽镜等侵入性检测手段的补充，用于鼻咽癌的临床早期辅助诊断[8](Cheng,W.M.等，Int J Cancer，2002)。过去十多年，针对中山等地的人群队列筛查结果显示，基于ELISA的 VCA-IgA和/或NA-IgA抗体筛查可将鼻咽癌的早诊率提高3-4倍，入组筛查的鼻咽癌患者， 5年生存率显著提高，对人群风险管理及尽早干预治疗大有裨益[9](Yu X.等，J Cancer，2018)。 此外，由于不同抗体标志物在特异性、敏感性及窗口期上存在一定差异，采用多项指标组 合检测，可有效提高筛查的特异性和准确率[10](Chen,H.等，Cancer Prev Res(Phila)，2017)。