[发明专利]血小板储存方法和用于所述方法的组合物

说明书

本发明涉及血小板储存方法和用于所述方法的组合物。本发明公开了用于血小板冷藏的组合物，该组合物包含选自以下的RHOA抑制剂或其盐或其组合以及包含无菌水的可药用载体。本发明还公开了一种储存血小板的方法，包括形成如包含血小板的上述组合物，并将所述组合物储存于约0℃到约25℃的温度。

本申请为国际申请PCT/US2015/066252于2017年12月18日进入中国国家阶段、申请号为201580081006.9、发明名称为“血小板储存方法和用于所述方法的组合物”的分案申请。

与相关申请的交叉引用

本申请为所有目的整体要求2015年6月18日提交的同一标题的美国专利申请系列号14/743,213的优先权和利益。

技术领域和背景技术

血小板计数低的患者通常需要血小板输注。这在患有癌症或大面积创伤的患者的治疗中特别关键。自从二十世纪九十年代以来，血小板输注的使用急剧增加，但仍未获得安全、长期的血小板储存方法。将血小板成功地冷藏储存历时长时间段例如7天或更长时间的演示，将急剧改变西方世界的现行血小板输注方法。在美国，每年使用大约 3,000,000剂血小板，年销售额为约15亿美元。目前短的储存期限代表了将血小板产品转变成有效商品的主要障碍。取决于年、月或甚至周的不同时间，有多达20％的产品可能由于过期而被浪费。同时，由于不可预测的用量增加，存在着血小板短缺的时候。延长血小板产品的储存期限将强化用于肿瘤和创伤患者的血小板国家库存。由于1份红细胞:1份血小板:1份血浆产品的输注政策，美国政府预计在战争伤亡和严重创伤患者中对血小板和血浆产品的需求估计增加10倍。

当前做法是将血小板在制备后储存在20至24℃下，这具有最长5 天的有限寿命，主要是由于担心细菌污染。用于输注的血小板产品的细菌污染是血库储存中的主要安全问题。输注被污染产品的后果是易感的癌症患者群体中发病-死亡率提高(1)。已开发了不同技术旨在将细菌污染的风险降至最低，包括分袋收集、使用自动培养系统的细菌检测和病原体缩减系统(2-6)。尽管已经显著降低了与血小板输注相关的脓毒症的病例数目，但与输注相关的脓毒症的风险仍在每15,000 至86,000例血小板输注中1例的范围之间(7,8)。将血小板像红细胞那样在低温下储存将减少大多数细菌的增殖并允许更长的储存时间 (9)，最小化由FDA批准的(11)血小板的短的储存时间(5天)这一当前的缺点(10)。然而，常规的血小板冷储存受到冷却血小板的 24小时恢复率显著降低(14)这一发现的阻碍。

对开发防止血小板冷藏损伤的方法存在巨大需求，并且长期以来一直被认为是血库的发展方向。这些发展将革新当前的血小板储存方法。本公开解决了一个或多个这些现有技术中的缺陷。

发明内容

本文公开了用于减缓、阻止或逆转特别是在血库存储期间或血小板冷藏期间可能发生的血小板损伤中的一者或多者的组合物和方法。所述组合物可以包含一种或多种RAC抑制剂、CDC42抑制剂、RHOA 抑制剂或其组合。所述组合物还可以包含可药用载体。

附图说明

图1A-1B描绘了涉及Rho GTP酶的“冷受体”启动的细胞内事件的示意模型。1A.寒冷引起肌动球蛋白变化、Ca²⁺动员、血影蛋白锚定的丧失和Gplb簇集。1B.“冷受体”可能刺激Cdc42、Rac和/或Rho 活化，其进而控制脂筏组装和肌动球蛋白重新组织，引起Gplb簇集。

图2描绘了Rho GTP酶抑制剂的化学结构和靶。

图3A-D描绘了Casin结合到Cdc42表面沟的对接模型和证实 Casin活性的数据。3A.活化所需的Casin结合到Cdc42表面沟的对接模型。3B.在GST-PAK拉下实验中胶原蛋白诱导的Cdc42活化被Casin (10μM)抑制。3C.纤维蛋白原介导的血小板肌动蛋白丝状伪足结构被Casin(10μM)阻断。附连到胶原蛋白包被表面的血小板的罗丹明偶联的鬼笔环肽染色。3D.胶原蛋白诱导的聚集被10μM Casin阻断 (上图)并在清洗抑制剂处理的血小板后可逆(最