[发明专利]一种用于他汀类药物疗效预测的检测试剂盒及其检测方法和应用

说明书

本发明公开了一种用于他汀类药物疗效预测的检测试剂盒及其检测方法和应用，其中，所述试剂盒用于检测他汀类药物疗效相关基因ApoE T388C和ApoE C526T两个基因的多态性，试剂盒包括如下组分：扩增反应液、ApoE T388C扩增引物、APOE T388C测序引物、ApoE C526T扩增引物、ApoE C526T测序引物和阳性对照。本发明采用多重RPA扩增和优化焦磷酸测序技术为组合对他汀类药物疗效的相关的基因多态性进行检测，试剂盒可同时检测ApoE(T388C)、ApoE(C526T)基因多态性汀类药物，为临床个性化用药给出基因角度的建议。

技术领域

本发明涉及一种用于他汀类药物疗效预测的检测试剂盒及其检测方法和应用，属于基因检测领域。

背景技术

根据我国流行病学调查，中国成人血脂异常总体患病率在2012年高达40.40％，较10年前呈大幅度上升，血清总胆固醇(TC)水平的升高将导致未来中国心血管病事件增加约920万。他汀类药物在ASCVD一级和二级预防中均能显著降低心血管事件风险，是防治此类疾病最为重要的药物。然而不同的他汀在化学结构上虽有相似之处，但它们在药代动力学、与其他药物相互作用、药物疗效以及他汀导致的不良反应方面存在个体间的差异，而这些差异部分是归因于常见药物基因的遗传与变异。载脂蛋白E(ApolipoproteinE，ApoE)是一种存在于乳糜微粒和中间密度脂蛋白中的载脂蛋白，主要由肝脏和巨噬细胞产生，参与血脂的运输、存储和排泄。

载脂蛋白E(ApoE)通过多种途径参与机体的脂质代谢调节，是影响机体血脂水平的重要内在因素。ApoE多态性被认为是高脂蛋白血症及动脉粥样硬化性血管病的易感候选基因。人类ApoE基因定位于19号染色体上，有4个外显子和3个内含子，主要有两种单核苷酸多态性526CT和388TC，可以形成3种单倍型分别是ApoE3(388T-526C)、ApoE2(388T-526T)、ApoE4(388C-526C)。文献报道，ApoE4携带者患冠心病的风险要高40％，并且他汀类药物对ApoE4携带者疗效往往不佳或无疗效，而对ApoE2携带者的降脂作用最强。目前FDA已将APOE2列为普伐他汀药物反应相关的生物标记。

目前，对于基因多态性检测的方法有很多种，如直接测序法、芯片法、高分辨率熔解曲线法、等位基因特异性扩增法、taqman荧光探针法等。其中，测序法和芯片法，操作步骤繁琐，检测周期长，且扩增产物容易产生污染；高分辨率熔解曲线法步骤简单，特异性偏低，且对仪器设备的要求较高；等位基因特异性扩增法采用ARMS引物进行特异扩增，其引物设计难以最优化，检测条件要求严格。Taqman荧光探针法其试验成本高，对于多个基因的扩增通量不高。因此，需要建立一种简单、快速有效、价格低廉、特异性高的检测基因多态性的方法。

发明内容

针对现有技术存在的上述问题，本发明的目的是以用于他汀类药物疗效预测的检测试剂盒及其检测方法和应用为基础，获得一种用于他汀类药物疗效预测的检测试剂盒及其检测方法和应用。

为实现上述发明目的之一，本发明采用的用于他汀类药物疗效预测的检测试剂盒及其检测方法和应用的技术方案如下：

本发明的检测试剂盒针对ApoE(T388C)、ApoE(C526T)两个基因的多态性设计特异性扩增引物和测序引物，所述试剂盒包括如下组分：试剂1、试剂2、ApoE(T388C)测序引物、ApoE(C526T)测序引物、阳性对照。

优选地，所述设计特异性引物，如下表所示：

优选的，所述ApoE(T388C)的特异性引物组序列如序列表SEQ ID NO:1～SEQ IDNO:2所示；所述ApoE(C526T)的特异性引物组序列如序列表SEQ ID NO:3～SEQ ID NO:4所示。

优选的，所述的ApoE(T388C)测序引物、ApoE(C526T)测序引物分别如序列表SEQID NO:5～SEQ ID NO:6所示。