[发明专利]具免疫活性的平卧菊三七多糖及其制备方法和应用

说明书

一种平卧菊三七多糖，从平卧菊三七中制得，为均一的中性杂多糖，主要由葡萄糖(Glc)、甘露糖(Man)、半乳糖(Gal)、木糖(Xyl)、鼠李糖(Rib)和阿拉伯糖(Ara)按48.6:20.0:15.7:9.7:3.3:2.6的摩尔比组成，分子量为4886.68Da。本发明的平卧菊三七多糖能够抑制LPS诱导的细胞毒性对THP‑1细胞的影响，通过抑制SEAP和荧光素酶降解分别阻断LPS诱导的巨噬细胞中NF‑κB/ISG信号通路，实验结果证明本发明多糖具有抗感染免疫活性。本发明的平卧菊三七单体均一多糖结构明确，多糖的单糖组成多样，可作为抗感染免疫类药物进行开发应用。

技术领域

本发明属于多糖和医药用途领域，涉及平卧菊三七多糖，同时涉及该多糖的制备方法，进一步涉及该平卧菊三七多糖的抗感染免疫活性作用。

背景技术

多糖是一类大分子物质，广泛存在于生物体中。此外，多糖具有多种生物活性，如免疫调节、抗肿瘤、抗氧化和降血糖活性。由于植物多糖具有无毒无公害等特点，与合成化合物相比不会引起明显的副作用，因此它们是现代医学的理想候选物。

平卧菊三七是一种药用植物，广泛应用于许多国家，以治疗各种疾病，如风湿病、糖尿病、便秘、高血压等。目前对平卧菊三七的研究主要集中在黄酮、皂苷等方面的研究，多糖的分离纯化也有相关报道，但对于平卧菊三七多糖的明确结构和相关药理活性机制的系统研究未见报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种结构明确的具免疫活性的平卧菊三七多糖，同时提供该平卧菊三七多糖的制备方法，还提供该平卧菊三七多糖的抗感染免疫活性作用。

为达上述目的，本发明采用的技术方案是：一种平卧菊三七多糖，其为均一的中性杂多糖，主要由葡萄糖(Glc)、甘露糖(Man)、半乳糖(Gal)、木糖(Xyl)、鼠李糖(Rib)和阿拉伯糖(Ara)按48.6:20.0:15.7:9.7:3.3:2.6的摩尔比组成，分子量为4886.68Da。

本发明的多糖结构是以吡喃糖环Glc为主骨架构成，其主要结构由Araf-(1→,→4)-Rhap-(1→,→4)-Xylf-(1→,Manp-(1→,Galp-(1→,→4)-Glcp-(1→,→6)-Glcp-(1→,→3)-Galp-(1→,→6)-Manp-(1→,→4,6)-Glcp-(1→组成。

本发明的上述平卧菊三七多糖是由以下方法制备得到：

(1)以平卧菊三七茎为原料，利用水提醇沉法制得粗多糖；

上述水提醇沉法为常规技术，粗多糖的制备过程为：将平卧菊三七茎用水超声提取得到水提取液，离心，上清液用乙醇沉淀；去除沉淀中的蛋白，透析，用乙醇沉淀；将沉淀离心，乙醇洗涤，干燥即得粗多糖。具体地，上述粗多糖的制备过程为：取平卧菊三七茎，于其中加入为平卧菊三七茎重量10-25倍的水，超声提取35-65分钟，其中，超声功率为50W-90W，温度为60-85℃；将得到的水提取液过滤，在6000×g下离心5-15min，上清液用75％-90％质量浓度的乙醇在室温下沉淀12-24h；用Sevag法去除沉淀蛋白，在透析袋中透析36-60h，然后用75％-95％质量浓度的乙醇沉淀12-24h；将得到的沉淀在6000×g下离心5-15min，用75％-95％质量浓度的乙醇洗涤三次，然后将沉淀干燥后收集，即得粗多糖。

(2)将粗多糖采用大孔吸附树脂柱，用水洗脱去除非糖杂质，收集水洗脱分、冻干，得初步纯化的多糖；

较佳的，上述大孔吸附树脂柱采用非极性吸附树脂，如AB-8/D-101等。

(3)将初步纯化的多糖采用阴阳离子交换树脂柱，依次用蒸馏水、0.3mol/L氯化钠溶液和0.5mol/L氯化钠溶液进行洗脱，收集蒸馏水洗脱组分，冷冻干燥后再采用凝胶层析柱，依次用蒸馏水、0.3mol/L氯化钠溶液和0.5mol/L氯化钠溶液进行洗脱，收集主要洗脱峰的洗脱液，浓缩、冷冻干燥，得到本发明的平卧菊三七多糖GPPs-b。