[发明专利]一种DC瘤苗制备方法及其在肿瘤治疗中的应用

权利要求书

1.DC瘤苗和PD-1单克隆抗体的组合在制备用于治疗肝癌的药物中的用途，其特征在于：DC瘤苗的制备方法如下：

（1）将人外周血与PBS按照1：4混合均匀，将稀释后的血液以1：1比例缓慢加入淋巴细胞分离液上方，4℃ 2000r／min离心15min，小心吸取单个核细胞层，加入另一离心管中，并用4倍体积PBS洗涤，1000r／min离心5min，离心去除淋巴细胞分离液，PBS洗涤两次后，即获得外周血单核细胞；

（2）外周血单核细胞悬浮于RPMI1640培养基中，调整浓度为l0⁸/ml，于细胞培养板上贴壁，在37℃、5％CO₂条件的培养箱中贴壁培养3～6h后，收集悬浮细胞，贴壁细胞PBS荡洗两次后为DC前体细胞，于显微镜下观察计数，加入添加了终浓度为10%FBS，白藜芦醇 5mmol/L，GM-CSF 800U／ml和IL-4 1000U／ml的RPMI1640培养基，细胞浓度约为l0⁶/ml并继续孵育24h，洗涤后，加入添加了终浓度为10%FBS，GM-CSF 800U／ml 和IL-4 1000U／ml的RPMI1640培养基，继续培养3d即得DC成熟细胞；

（3）对数生长期的肝癌细胞，调整细胞浓度为5×10⁶／ml，分装到试管中，每管2ml，高强度聚焦超声焦点定位于细胞悬液中央，启动系统采用1000W／cm²×30s辐照肝癌细胞，将辐照后的细胞裂解液以2000转／min离心10min，取上清液，经0.2μm的滤器过滤除菌后，收集备用；

把上述方法（3）制备的肝癌细胞抗原加入步骤（2）制备的 DC成熟细胞中共培养 24h，DC与抗原的比例为1：15，抗原的量以抗原制备前肿瘤细胞的数量计算 ，获得DC瘤苗；

其中PD-1单克隆抗体轻链可变区如SEQ ID NO：1所示，重链可变区如SEQ ID NO：2所示。

2.如权利要求1所述的用途，其特征在于所述药物包含药学上可接受的载体或赋形剂。

3.如权利要求2所述的用途，其特征在于药学上可接受的载体或赋形剂是填料，稀释剂或包封材料。

4.如权利要求3所述的用途，其特征在于载体或者赋形剂为缓冲盐水，葡萄糖，水，甘油或乙醇。

5.如权利要求4所述的用途，药物组合物是溶液，悬浮液，乳剂或固体可注射组合物的形式。