[发明专利]一种草地贪夜蛾种特异性引物对及试剂盒和鉴别方法有效
| 申请号： | 202110650724.0 | 申请日： | 2021-06-10 |
| 公开（公告）号： | CN113308552B | 公开（公告）日： | 2023-04-07 |
| 发明（设计）人： | 岳碧松;王磊;张雪莲 | 申请（专利权）人： | 四川大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6888 | 分类号： | C12Q1/6888;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 成都知棋知识产权代理事务所(普通合伙) 51325 | 代理人： | 马超前 |
| 地址： | 610065 四*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 草地 夜蛾 特异性 引物 试剂盒 鉴别方法 | ||
1.一种采用核苷酸序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示的种特异性引物对及核苷酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的线粒体DNA COⅠ通用引物对检测草地贪夜蛾的试剂盒，其特征在于，在斜纹夜蛾、甜菜夜蛾、粘虫和玉米螟中鉴定出草地贪夜蛾；其中，所述种特异性引物对和线粒体DNA COⅠ通用引物对的浓度比为1：2，核苷酸序列如SEQ IDNO.3和SEQ ID NO.4所示的种特异性引物的浓度均为10 μM，用量均为0.4 μL；核苷酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的线粒体DNA COⅠ通用引物的浓度均为10 μM，用量均为0.8 μL；多重PCR反应的退火温度Tm为56.5~59.5℃。
2.一种基于多重PCR鉴别草地贪夜蛾的方法，其特征在于，该方法采用核苷酸序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示的种特异性引物对及核苷酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ IDNO.2所示的线粒体DNA COⅠ通用引物对进行多重PCR反应，若扩增得到349 bp和COⅠ 目的条带的扩增产物，则待测昆虫为草地贪夜蛾；该方法用于在斜纹夜蛾、甜菜夜蛾、粘虫和玉米螟中鉴定出草地贪夜蛾；
其中，所述种特异性引物对和线粒体DNA COⅠ通用引物对的浓度比为1：2，核苷酸序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示的种特异性引物的浓度均为10 μM，用量均为0.4 μL；核苷酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的线粒体DNA COⅠ通用引物的浓度均为10 μM，用量均为0.8 μL；多重PCR反应的退火温度Tm为56.5~59.5℃。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，该方法的多重PCR反应体系的成分包含：Taq DNA Polymerase、10×Taq Buffer、dNTPs、核苷酸序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示的种特异性引物对、核苷酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的线粒体DNA COⅠ通用引物对、待测昆虫的DNA基因组、ddH2O。
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