[发明专利]一种分级多孔金属有机骨架传感探针的制备方法和由此构建的传感探针及其应用

说明书

本发明涉及一种具有分级多孔金属有机骨架传感探针的制备方法，其包括提供具有连续可调的介孔孔径的固定有氧敏分子的分级多孔金属有机骨架纳米粒子；将肌氨酸氧化酶装载到固定有氧敏分子的分级多孔金属有机骨架纳米粒子中，肌氨酸氧化酶通过吸附装载在分级多孔金属有机骨架纳米粒子的介孔孔道内，得到固定有酶的分级多孔金属有机骨架传感探针。本发明还提供由此构建的传感探针及其应用。本发明通过固定肌氨酸氧化酶作为肌氨酸的识别中心，发光检测具有高度特异性，在复杂生物样本中对肌氨酸的发光定量检测不受干扰。适用于临床尿样中肌氨酸癌标物的特异性检出，提供了一种便捷、快速、特异性的发光检测技术，用于前列腺癌患者的筛查和诊断。

技术领域

本发明涉及酶固定化和分析化学，更具体地涉及一种分级多孔金属有机骨架传感探针的制备方法和由此构建的传感探针及其应用。

背景技术

前列腺癌是严重影响男性健康的常见癌症之一(Int J Mol Sci.2013,14,13893-13908)。对于大多数患者来说，早期没有明显的临床症状，因此前列腺癌的早期筛查对提高患者的生活质量和降低死亡率至关重要。肌氨酸被证实是早期前列腺癌的一种临床生物标志物，尿液中肌氨酸的水平可用于简单无创的早期诊断(Nature 2009,457,910-914)。相比于传统的前列腺特异性抗原检测法，发光检测技术具有灵敏度高、操作简单、反应时间快、无需复杂的预处理等优点，非常适用于肌氨酸等小分子代谢标志物的临床检测(ACSSens.2017,2,31-45)。一般来说，肌氨酸在健康人群的尿液样本中浓度为1 3×10^-6mol·L^-1，而前列腺癌患者的尿液中肌氨酸水平会明显升高，但增加量不超过一个数量级(EXCLIJournal 2018,17,467-478)。

然而，发光探针通常容易受临床样本中大量生物分子的多种干扰(Anal.Chem.2018,90,14578-14585)。因此，很难精确区分生物标志物的微小浓度变化，从而导致假阳性/阴性诊断的风险。因此，发展高度灵敏和特异性的发光检测技术，精确区分肌氨酸标志物在实际临床样本中的微小浓度变化，是实现前列腺癌患者精准筛选的关键。

发明内容

本发明公开了一种分级多孔金属有机骨架传感探针的制备方法和由此构建的传感探针及其应用，通过发光定量检测临床尿样中肌氨酸的含量，提供了一种简便、可靠、特异的检测方法来筛选前列腺癌患者。

本发明提供一种的分级多孔金属有机骨架传感探针的制备方法，其包括步骤：S1，将氧敏分子固定到分级多孔金属有机骨架纳米粒子中，得到具有介孔孔道的固定有氧敏分子的分级多孔金属有机骨架纳米粒子，其中，氧敏分子通过共组装一步合成法固定到分级多孔金属有机骨架纳米粒子的孔壁中，得到的固定有氧敏分子的分级多孔金属有机骨架纳米粒子(TCPP-Pt@HMUiO)具有连续可调的介孔孔径；S2，将肌氨酸氧化酶(SOX)通过吸附装载到固定有氧敏分子的分级多孔金属有机骨架纳米粒子(TCPP-Pt@HMUiO)的介孔孔道中，得到固定有SOX酶的分级多孔金属有机骨架传感探针(TCPP-Pt/SOX@HMUiO)。

优选地，氧敏分子为铂(II)内消旋四(4-羧基苯基)卟啉(TCPP-Pt)。