[发明专利]抗TCRβF1蛋白单克隆抗体及其细胞株、制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种可以识别人TCRβF1抗原的单克隆抗体，分泌细胞株、其制备方法以及其在免疫检测中的用途。上述技术方案选取TCRβF1蛋白的1‑176位氨基酸片段，进行密码子优化，成为适合在大肠杆菌BL21表达的TCRβF1重组肽段，最后得到的重组蛋白包含TCRβF1重组肽段及组氨酸蛋白标签。所述重组蛋白对小鼠进行免疫，经细胞融合、筛选和亚克隆，获得高效分泌抗TCRβF1蛋白单克隆抗体的小鼠杂交瘤细胞株38C2,以及由该细胞株所分泌的抗TCRβF1蛋白单克隆抗体。本方案得到的抗体具有高特异性、敏感性，可以特异性识别表达TCRβF1蛋白的细胞，适用于免疫学检测，特别是免疫组化检测。

技术领域

本发明涉及生物医学工程领域，特别涉及一种抗TCRβF1蛋白单克隆抗体及其细胞株、制备方法和应用。

背景技术

根据T细胞抗原受体(TCR)标志物βF1及TCRγ的表达情况，我们通常将成熟T细胞分为αβT细胞及γδT细胞。在外周T细胞淋巴瘤中，有些类型的淋巴瘤细胞来源是确定的，如皮下脂膜炎样T细胞淋巴瘤、蕈样霉菌病、Sezary综合征及原发性皮肤CD8侵袭性亲表皮性细胞毒性T细胞淋巴瘤均属于αβT细胞来源，皮肤γδT细胞淋巴瘤及绝大部分肝脾T细胞淋巴瘤起源于γδT细胞；而某些类型如非特指型外周T细胞淋巴瘤、亲上皮性肠道T细胞淋巴瘤，则既可以是αβT细胞来源，也可以是γδT细胞或是TCR沉默型(即不表达任何TCR标志物)。αβT细胞及γδT细胞在外周血T淋巴细胞中占比分别为≥85％及≤15％。而在胸腺未成熟T细胞中，几乎均为αβT细胞，γδT细胞占比极少(3％～5％)。

据报道，绝大多数γδT-ALL/LBL发生于成人，αβT-ALL/LBL在儿童、青少年及成人均可见，但更常见于儿童及青少年患者。因此，TCRβF1、TCRγδ和TCR CγM1主要用于T细胞及其发生的肿瘤分型的研究。

发明内容

发明人提供了一种抗TCRβF1蛋白单克隆抗体，所述单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列；所述单克隆抗体轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO.5所示的氨基酸序列。

进一步地，所述单克隆抗体的重链可变区的DNA序列为SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列，所述单克隆抗体的轻链可变区的DNA序列为SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列。

进一步地，所述单克隆抗体特异性识别TCRβF1蛋白。

进一步地，所述单克隆抗体为小鼠IgG_2a亚型单克隆抗体。

进一步地，所述单克隆抗体由保藏号为CGMCC NO 20778的杂交瘤细胞株产生。

发明人又提供了一种抗TCRβF1蛋白单克隆抗体的制备方法，其用于免疫小鼠的抗原为重组蛋白，所述重组蛋白由大肠杆菌重组表达，包含TCRβF1重组肽段及组氨酸蛋白标签；所述TCRβF1重组肽段的氨基酸序列为SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。

发明人还提供了一株分泌抗TCRβF1蛋白分子的杂交瘤细胞株，所述细胞株为小鼠杂交瘤细胞株38C2，所述细胞株已于2020年9月17日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC NO 20778，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。

发明人还提供了上述单克隆抗体在TCRβF1蛋白免疫检测中的用途。

进一步地，所述免疫检测包括免疫组织化学法，免疫印迹法和酶联免疫法。

发明人最后提供了一种TCRβF1蛋白免疫组化检测试剂，所述免疫组化检测试剂含有重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列；轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO.5所示的氨基酸序列的抗TCRβF1蛋白单克隆抗体为其有效成分。