[发明专利]一株产热稳定和pH稳定细菌素的乳酸乳球菌及其筛选方法和应用

权利要求书

1.一株产热稳定和pH稳定细菌素的乳酸乳球菌，其特征在于，所述乳酸乳球菌筛选自自然发酵的泡菜，命名为NCU036018。

2.根据权利要求1所述的产热稳定和pH稳定细菌素的乳酸乳球菌，其特征在于，所述乳酸乳球菌的16S rRNA序列如SEQ ID：1所示。

3.根据权利要求1所述的产热稳定和pH稳定细菌素的乳酸乳球菌，其特征在于，所述乳酸乳球菌株于2021年3月26日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.22077。

4.根据权利要求1-3任一项所述的一株产热稳定和pH稳定细菌素的乳酸乳球菌的筛选方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)培养：取泡菜样品液1mL用生理盐水进行梯度稀释，选取合适浓度梯度，涂布于MRS固体培养基上，37℃倒置培养46-50h；

(2)纯化：挑取步骤(2)培养基上具有不同形态的单菌落进行连续划线纯化培养；

(3)保存：挑取步骤(3)纯化好的单菌落于10mL MRS液体培养基中孵育22-25h，分别取培养液和50％的灭菌甘油各500μL按1:1(v/v)混合并保存于-80℃冰箱；

(4)活化：将步骤(3)分离保存的菌株接种到MRS液体培养基中，37℃活化22-25h，再以2％的接种量接种到MRS液体培养基中，37℃恒温培养22-25h得到乳酸菌发酵液；

(5)分离：将步骤(4)中发酵液离心收集上清液，调节上清液pH为6.5并用0.22μm微孔滤膜过滤，滤液采用高压灭菌锅121℃加热30min，置于4℃备用；

(6)筛选：将培养24h后的指示菌加入至LB培养基中，混匀后倒平板，待冷却凝固后打8mm的孔，每皿三个孔，向每个孔中加入200μL步骤(5)制备好的滤液，37℃下培养14-16h，测定抑菌圈直径，根据抑菌圈直径大小筛选抑菌性能优异的菌株。

5.根据权利要求4所述的一株产热稳定和pH稳定细菌素的乳酸乳球菌的筛选方法，其特征在于，所述步骤(1)中泡菜样品采自市场上不同种类自然发酵的泡菜，浓度梯度设置为10^-3，10^-4，10^-5。

6.根据权利要求4所述的一株产热稳定和pH稳定细菌素的乳酸乳球菌的筛选方法，其特征在于，所述步骤(5)中离心转速为6500-7000g，分离时间为10-12min。

7.根据权利要求4所述的一株产热稳定和pH稳定细菌素的乳酸乳球菌的筛选方法，其特征在于，所述步骤(6)中指示菌为金黄色葡萄球菌和鼠伤寒沙门氏菌，其加入到LB培养基中后的浓度为1.0×10⁷CFU/mL。

8.一种根据权利要求1-3任一项所述的乳酸乳球菌生产的细菌素，其特征在于，所述细菌素能在pH 2-10范围内同时抑制鼠伤寒沙门氏菌和金黄色葡萄球菌。

9.根据权利要求8所述的细菌素，其特征在于，所述细菌素的生产时间为15-16h。

10.一种根据权利要求8或9所述的细菌素在食品发酵和保藏过程中的应用。