[发明专利]一种降解氯酚菌群的原位筛选及复合菌剂制备方法

权利要求书

1.一种降解氯酚菌群的原位筛选，其特征在于，包括以下步骤：

原料筛选：选取带有厌氧颗粒的污泥，并在真空中搅拌，之后挤压成直径在5-6mm范围内的原料颗粒；

原料培养：在筛选后的原料颗粒外部均匀涂抹培养基，并使用热风机对原料颗粒加热，待培养基将原料颗粒包裹起来，得到厌氧原料；

原料驯化：对厌氧原料放入到厌氧反应器中进行驯化，驯化后采用稀释倍数法在培养基上进行培养；

细菌提取：对驯化后的细菌进行分离和钝化得到试剂，之后再向试剂中添加氯酚，得到初筛菌液；

细菌复筛：将得到的菌液接种到固体培养基中涂布培养，待长出菌体后，用灭菌针挑出菌落接种到液体培养基中，待液体培养基中长出菌株后，摇匀菌液，直到从细胞形态鉴定确认为单一菌体为止；

菌剂：将通过上述步骤制得各种厌氧菌混合，并放入氯酚溶液中浸泡，得到菌剂。

2.根据权利要求1所述的一种降解氯酚菌群的原位筛选，其特征在于：原料筛选时，将污泥与琼脂倒入真空搅拌机中搅拌，搅拌后倒入制粒机制成原料颗粒。

3.根据权利要求1所述的一种降解氯酚菌群的原位筛选，其特征在于：在原料颗粒表面涂抹培养基时包括以下步骤：

初步涂抹：先涂抹直径在1-2mm范围内的琼脂颗粒，再使用热风机以50-58℃的温度对琼脂颗粒的外部加热，加热2-3min后，得到第一层密封层；

二次涂抹：在第一层密封层的外部涂抹直径在0.5-1mm范围内的琼脂颗粒，再使用热风机以65-75℃的温度对琼脂颗粒的外部加热，加热4-6min后，得到第二层密封层；

三次涂抹：在第一层密封层的外部涂抹直径在0.1-0.2mm范围内的琼脂颗粒，再使用热风机以76-80℃的温度对琼脂颗粒的外部加热，加热4-6min后，得到第三层密封层。

4.根据权利要求1所述的一种降解氯酚菌群的原位筛选，其特征在于：原料培养中，培养基包括以下组分：酵母浸汁50-56份、蛋白陈12-18份、琼脂40-45份、麦芽糖20-40份、胰蛋白陈5-8份、营养肉汤4-5份。

5.根据权利要求1所述的一种降解氯酚菌群的原位筛选，其特征在于：细菌复筛过程中，待长出菌株后，将菌液接种到固体培养基进行形态鉴定，或进行显微镜观察和鉴定细胞形态是否相同来判断分离纯化是否成功，如果菌体不纯，继续采用固体-液体培养基交替培养方法进行分离和纯化。

6.一种复合菌剂的制备方法，其特征在于，包括降解氯酚菌群的原位筛选，该复合菌剂的制备方法包括以下步骤：

初步混合：将不同厌氧菌菌剂放入都不同的试管中，并分别向菌剂中滴加氯酚溶液，并在40-45℃温度下保存5-8min；

滴加混合：选择其中一种菌剂，将其滴加其他菌剂中，并静置，同理再选取一种菌剂滴加都其他菌剂中，最终将所有菌剂混合，得到混合菌剂。

7.根据权利要求6所述的复合菌剂的制备方法，其特征在于：初步混合时，氯酚溶液与菌剂的比例为1:28，同时滴加前，将氯酚溶液加热到30-38℃。

8.根据权利要求6所述的复合菌剂的制备方法，其特征在于：滴加混合时，每次滴加之间的间隔为80-100min，同时滴加前，加入与菌剂1：1的清水，当静置后沉淀物增加时，将该试剂倒掉。