[发明专利]一种促进通关藤生长的内生菌筛选方法

说明书

本发明公开一种促进通关藤生长的菌株筛选方法，具体包括以下步骤：步骤1，分离通关藤根、茎、叶中的内生细菌；步骤2，分离通关藤根、茎、叶中的内生真菌；步骤3，鉴别获得的内生菌菌株种类；步骤4，检测获得的内生菌的促生潜力；步骤5，检测内生菌株对促进通关藤生长的效果；本发明通过从通关藤中分离内生菌，通过全面的系统化检测筛选出对促进通关藤生长效果较好的内生菌，将筛选结果应用于通关藤栽培，能获得较好的作用效果。

技术领域

本发明属于通关藤栽培技术领域，特别是涉及一种促进通关藤生长的内生菌筛选方法。

背景技术

通关藤[Marsdenia tenacissima(Roxb.)Wight et Arn.]为萝藦科牛奶菜属多年生木质藤本植物，通关藤主要分布于云南南部、广西西部、贵州西南部及四川南部等地，根据资源集中程度可依次分为滇东南、桂西片区、滇西南片区、黔西南片区等四大片区，分布于海拔850～1250m的喀斯特地石灰岩山区，喜光，适生于温暖湿润的环境，是西南地区常用的民族药之一。通关藤的药用部位为干燥藤茎，有效成分为甾体皂苷、生物碱和多糖。研究发现C21甾体类化合物是通关藤中具有抗肿瘤作用的主要活性物质，具有抗肿瘤、降压、平喘等作用。

随着通关藤药用价值的开发利用，生产上的原材料仅来自于野生资源和自然繁育，野生资源被大幅度的胡乱开采而造成资源的破坏严重，野生资源越来越不能满足市场需求，蕴藏量在急剧地下降急需对其进行保护。利用人工种植通关藤代替野生资源刻不容缓，在人工种植如何提高通关藤生长速度，提高药用品质等问题上仍有待突破。萝藦科植物的花粉以花粉块的形式存在，这是该科植物的典型特征，通关藤尤为典型。萝藦科植物的坐果率一般都比较低，平均0.33％～5.00％。目前，规范化栽培和野生抚育种植的通关藤苗均以种子直播和扦插为繁殖方式。但由于通关藤坐果率普遍都比较低，使通关藤花多果少，产生的种子数量也少，种子萌发率不高，种子在浸泡过程中，吸水过多，会发生腐烂，成为利用种子进行扩大繁殖的一个限制因素，通关藤在自然环境下从种子到用药需要3-4年，生长速度缓慢；而扦插的方法成活率虽然较高，但在后期容易感病。并且，通关藤的扦插繁育技术的条件还在摸索阶段，很多问题还没得到解决，难以满足市场的需求。还有研究者通过组织培养的方式来繁殖通关藤，只有中部茎的成功率较高，而且由于通关藤的根、茎、叶中都含有丰富的乳汁，在转接过程中会造成褐变，也不能很好的满足大量繁殖。植物组织培养技术不受季节、气候和地区等因素影响，可实现快速繁殖，但鲜见通关藤通过组培技术成功繁殖的报道。

内生菌可以促进植物生长，促进养分吸收，保护植物免受生物胁迫和非生物胁迫。内生菌还能产生内毒素或者植物生长调节剂或者获取更多营养保护植物免受病原菌的侵染。内生菌与宿主药用植物长期的协同进化过程中，也会使自身产生一些与宿主药用植物相似或相同的活性成分极具药用开发价值的潜力,克服了药用植物生长年限长等问题。内生菌除了自身产生与寄主相同的次生代谢物以外，内生菌还能刺激宿主植物产生次生代谢物，对人类健康和医学具有重要意义。目前农民使用农用化学农药促进通关藤生长，然而农用化学品的使用对环境造成污染，并且大大影响了通关藤的品质，因此需要寻找替代的环保微生物来源以促进通关藤生长。

发明内容

为解决上述现有技术存在的问题，本发明的目的在于提供一种促进通关藤生长的内生菌筛选方法。

为达到上述目的，本发明的技术方案为：

一种促进通关藤生长的菌株筛选方法，包括以下步骤：步骤1，分离通关藤根、茎、叶中的内生细菌；步骤2，分离通关藤根、茎、叶中的内生真菌；步骤3，鉴别获得的内生菌菌株种类；步骤4，检测获得的内生菌的促生潜力；步骤5，检测内生菌株对促进通关藤生长的效果。

进一步的，所述的一种促进通关藤生长的菌株筛选方法，包括以下步骤：

步骤1，分离通关藤根、茎、叶中的内生细菌；