[发明专利]外泌体联合透明质酸的伤口敷料及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了外泌体联合透明质酸的伤口敷料及其制备方法和应用，所述伤口敷料由透明质酸水凝胶包裹间充质干细胞外泌体构成，所述透明质酸水凝胶是透明质酸水溶液经过反复冷冻解冻再与碳二亚胺盐酸盐及已二酸二酰肼进行交联所获得。相应地，本发明还公开了上述外泌体联合透明质酸的伤口敷料的制备方法，以及其在促进伤口愈合药物或材料中的应用。本发明中的伤口敷料结合了间充质干细胞的外泌体和透明质酸水凝胶的特性，与伤口创面接触后，可促进血管再生、胶原合成，从而修复损伤的组织，且安全可靠，生物相容性好，对创面的愈合具有明显促进作用，不容易造成感染，愈合后不留疤痕。

技术领域

本发明涉及生物医用材料制备技术领域，尤其涉及外泌体联合透明质酸的伤口敷料及其制备方法和应用。

背景技术

由于某些全身性疾病导致人体免疫细胞受损；年老体弱、营养不良等导致细胞再生能力不足；创面感染、炎症反应等因素往往导致伤口难以愈合。随着科技进步，医学临床上对于伤口的照护方式越发追求效率及疗效，过去传统式之绷带、纱布、棉球等一般敷料难以满足现代的临床治疗需求，人们需要更有效率的伤口复原医材及更符合多样化疾病伤口的敷料，以保护创面、促进皮肤再生、加速伤口愈合。理想的敷料应具有良好的生物相容性，具有加速组织再生、促进气体交换、保护伤口免受外来微生物侵害、可吸收多余渗出物、易于更换新敷料等优势，但单一敷料很难达到理想效果，这促使人们不断探索组合敷料。

自1970年Rovee等人的人体实验证实湿润伤口上皮细胞移行增生的速度较快，能加速伤口的愈合后，湿润伤口愈合(moist wound healing,MWH)的观念开始被广泛接受。目前的新型湿性敷料包括以透明薄膜式敷料为代表的覆盖型外层敷料；以藻酸盐敷料、伤口胶为代表的内层填塞型敷料；以银离子敷料为代表的抗菌性敷料等，但其功能均较为单一且在湿润环境下吸收渗液的特性及通透性差，易导致感染。新一代敷料要基于创造最佳的环境，使上皮细胞顺畅迁移，从而利于伤口愈合而设计，除了要舒适地覆盖伤口，更要着重于其功能性发展，如：帮助伤口愈合、减少瘢痕形成、针对伤口类型之特化敷料等等，以达到缩短伤口愈合进程及减轻愈合后遗症的最终目的。

近年来，随着干细胞与再生医学迅速发展，外泌体的治疗优势日渐凸显。外泌体含有细胞特异的蛋白、脂质和核酸。外泌体能与细胞膜结合，直接进入细胞内部释放多种趋化因子、生长因子等，招募血管内皮细胞、促进其增殖和迁移来促进血管再生，以改善宿主血供，进而促进组织损伤修复。在小鼠的皮肤缺损模型中还表明，外泌体可以增加Ⅲ型胶原与Ⅰ型胶原的比例、TGF－β3与TGF-β1的比例以及MMP-3与TIMP-1的比例，激活ERK/MAPK通路，抑制成纤维细胞向肌成纤维细胞的转化，促进创伤区胞外基质的改建，最终抑制瘢痕的形成，可见外泌体在伤口愈合应用中具有广阔的前景。

透明质酸(HA)是一种重要的糖胺聚糖(GAG)，存在于许多人体组织的细胞外基质中，包括皮肤、结缔组织和神经组织，可参与伤口愈合过程的许多步骤，包括炎症和表皮再生。在伤口愈合的早期阶段，HA可提供一种基质协助成纤维细胞和内皮细胞的重组、增殖和迁移；在伤口愈合过程中能促进血管生成。且研究证明，HA在胎儿无疤痕愈合中起关键作用。足见，基于HA水凝胶的生物材料在伤口愈合、皮肤修复中起着关键性作用。纯的透明质酸存在易溶于水，吸收迅速，在组织中停留时间短，力学性能较差等缺陷，为了使透明质酸在生物材料领域的应用更广泛，就要对其进行化学改性，优化其性能，提高其材料硬度和机械性能，以扩大其应用范围。为提高透明质酸的力学性能和控制其降解率，常常对其进行化学修饰或交联，可通过交联、酯化、接枝、分子修饰和复合等方法进行改性。其中交联手段最为常见，常用的交联方法有酰肼交联、二硫化物交联、聚乙二醇交联、醛交联、碳二亚胺交联等。交联处理后的得到分子网状结构，使透明质酸分子链增长、平均分子质量增大、黏弹性增强、水溶性相对减弱、机械强度提高。但是在交联处理后的透明质酸会带有轻微的毒性，不利于后续作为载体应用在医药领域。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于，提供一种外泌体联合透明质酸的伤口敷料，安全可靠，生物相容性好，对创面的愈合具有明显促进作用，且不容易造成感染，愈合后不留疤痕。