[发明专利]一种野蔷薇内源多胺的测定方法及应用在审
申请号: | 202110633280.X | 申请日: | 2021-06-07 |
公开(公告)号: | CN113433231A | 公开(公告)日: | 2021-09-24 |
发明(设计)人: | 陈锐;程文翰;陈金萍;马道铖 | 申请(专利权)人: | 荆楚理工学院 |
主分类号: | G01N30/02 | 分类号: | G01N30/02;G01N30/06 |
代理公司: | 武汉智嘉联合知识产权代理事务所(普通合伙) 42231 | 代理人: | 丁倩 |
地址: | 448000 湖北省*** | 国省代码: | 湖北;42 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 野蔷薇 内源 测定 方法 应用 | ||
1.一种野蔷薇内源多胺的测定方法,其特征在于,所述方法包括:
步骤1、取野蔷薇组织研磨成粉末,向粉末中加入高氯酸,涡旋混合后,冰浴浸提;
步骤2、冰浴浸提后离心取200~400μL上清液作为冰浴浸提液,加入4μL苯甲酰氯、300μL 2mol/L NaOH,涡旋混合后,30~40℃水浴反应;
步骤3、反应结束后,加入饱和NaCl和乙醚,涡旋混合后,离心取上清,开盖离心使乙醚挥发完全,再加入甲醇,涡旋混合后,静置溶解;
步骤4、静置溶解完全后离心除杂,收集溶解液,定容后进行高效液相色谱检测,并根据多胺的标准曲线计算得到待测野蔷薇组织中的多胺含量。
2.根据权利要求1所述的测定方法,其特征在于,步骤2中,冰浴浸提后离心取300μL上清液作为冰浴浸提液。
3.根据权利要求1所述的测定方法,其特征在于,步骤2中,于37℃条件下进行水浴反应。
4.根据权利要求1所述的测定方法,其特征在于,步骤4中,所述高效液相色谱检测的参数包括:流动相为体积比60:40的甲醇:水;进样量15μL;流速1mL/min;检测波长254nm;柱温30℃;保留时间15min。
5.根据权利要求1所述的测定方法,其特征在于,步骤3中所述多胺的标准曲线测定方法包括:分别配制腐胺、亚精胺和精胺的标准品,用甲醇进行梯度稀释,并测定不同浓度的3种多胺与苯甲酰化反应后高效液相色谱检测时的峰面积,以浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制相应的标准曲线。
6.根据权利要求1所述的测定方法,其特征在于,步骤1中所述野蔷薇组织包括:花瓣、花苞、茎、不同生长时期的叶片以及愈伤组织。
7.根据权利要求6所述的测定方法,其特征在于,所述愈伤组织的培养方法包括:取野蔷薇新鲜幼嫩叶片,冲洗除尘后,于超净工作台上,依次乙醇和升汞消毒杀菌,得到无菌叶片,将所述无菌叶片切成小块,接种于愈伤组织培养基中,于无菌组培室培养。
8.根据权利要求1所述的测定方法,其特征在于,步骤1中取0.2g野蔷薇组织的粉末,向其中加入1.5mL浓度为5%的预冷高氯酸,涡旋混合后,冰浴浸提1h。
9.根据权利要求1所述的测定方法,其特征在于,步骤3中,加入400μL饱和NaCl和500μL乙醚,涡旋混合后,4℃,5000r/min离心取上清。
10.如权利要求1-9任一项所述的测定方法在探究野蔷薇内源多胺变化规律中的应用。
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