[发明专利]一种新型嵌合体TsCas12a蛋白及制备技术

说明书

本发明公开了一种新型嵌合体TsCas12a蛋白序列及制备技术。本发明研究发现一种在gRNA介导下对靶标序列特异性识别并具有非特异单链DNA切割活性的新型嵌合体Cas12a蛋白，作为新型CRISPR/TsCas12a系统应用于核酸检测，可在含有高浓度PEG、多种非离子型去垢剂和还原剂的反应体系中正常工作，为基于Cas12a的一步法分子检测提供了一种新的必要工具选择。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域。更具体地，涉及一种新型嵌合体TsCas12a蛋白及制备技术。

背景技术

在2015年，一种全新的第二类CRISPR-Cas系统-V型系统被发现，该系统中的效应蛋白被命名为Cpf1/Cas12a。2018年4月27日，Doudna团队和张锋团队同时在《Science》发表了两篇题为“Two distinct RNase activities of CRISPR-C2c2 enable guide-RNAprocessing and RNA detection”和“Multiplexed and portable nucleic aciddetection platform with Cas13, Cas12a, and Csm6”的论文。表明Cpf1/Cas12a具有两种不同的核酸酶活性，Cpf1/Cas12a在切割靶dsDNA的同时，还会降解靶dsDNA邻近的ssDNA。利用这种新的CRISPR技术：CRISPR-Cpf1/Cas12a，可以高灵敏度检测包括寨卡病毒感染，登革热病毒感染等在内的疾病，其原理在于将CRISPR-Cpf1/Cas12a与等温核酸扩增结合，检测特异性的RNA或DNA。另外，该系统还包含有一个切割时发出荧光的报告ssDNA。当Cpf1/Cas12a检测到靶标dsDNA序列时，其ssDNase活性就会切割报告ssDNA，释放可检测的荧光信号。将这两种技术结合起来的新系统能够以极低浓度检测RNA和单链DNA分子，具有很好的应用前景。根据张锋团队的研究结果显示，Cpf1/Cas12a蛋白同族间具有较大的差异，某些同族蛋白无活性。目前报道使用较多的lbaCas12a蛋白，其活性在含有高浓度PEG、非离子型去垢剂和还原剂的体系中无法正常工作。限制了其与多种等温扩增系统同时工作，对恒温扩增系统和Cas12a检测系统一管法的开发造成较大的困难。

发明内容

本发明涉及一种用于核酸检测的嵌合体TsCas12a蛋白。

所述TsCas12a蛋白Wedge region I区域氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述TsCas12a蛋白Wedge region I区域核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示。

所述TsCas12a蛋白Recognition domain I区域氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述TsCas12a蛋白Recognition domain I区域核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示。

所述TsCas12a蛋白Recognition domain II区域氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示；所述TsCas12a蛋白Recognition domain II区域核苷酸序列如SEQ ID NO.14所示。

所述TsCas12a蛋白Wedge region II区域氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示；所述TsCas12a蛋白Wedge region II区域核苷酸序列如SEQ ID NO.15所示。

所述TsCas12a蛋白PAM-interacting domain区域氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示；所述TsCas12a蛋白PAM-interacting domain区域核苷酸序列如SEQ ID NO.16所示。

所述TsCas12a蛋白Wedge region III区域氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示；所述TsCas12a蛋白Wedge region III区域核苷酸序列如SEQ ID NO.17所示。