[发明专利]一种分泌鸭新型呼肠孤病毒σC蛋白单抗的杂交瘤细胞、单抗及应用

说明书

本发明公开了一种分泌鸭新型呼肠孤病毒σC蛋白单抗的杂交瘤细胞、单抗及应用。所述杂交瘤细胞分类命名为杂交瘤细胞株NDRV YT A5‑B6，保藏号为CCTCC NO：C2021124。本发明杂交瘤细胞分泌的鸭新型呼肠孤病毒σC蛋白单抗，具有较高的效价，及较强的特异性。通过间接免疫荧光(IFA)和抗原表位的保守性分析表明，A5‑B6McAb仅与NDRV发生特异性反应，而不与CDRV和ARV发生反应；其抗原表位序列在不同地域和不同宿主来源的NDRV分离株中具有很高的保守性。本研究结果为进一步研究σC蛋白的结构和NDRV及其抗体临床检测方法的建立奠定基础。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种分泌鸭新型呼肠孤病毒σC蛋白单抗的杂交瘤细胞、单抗及应用。

背景技术

鸭呼肠孤病毒(duck reovirus，DRV)分为两种基因型，即Ⅰ型和Ⅱ型。基因Ⅰ型为经典鸭呼肠孤病毒(classical DRV，CDRV)，亦称番鸭呼肠孤病毒(Muscovey duck reovirus，MDRV)，该病毒主要感染番鸭和半番鸭，引起番鸭坏死性肝炎(俗称番鸭“白点病”或“花肝病”)，以肝脾等脏器出现大量粟粒状坏死灶为病理特征，该病在我国始发于1997，在我国南方广东、福建、浙江和江西等地广泛流行；基因Ⅱ型为鸭新型呼肠孤病毒(novel DRV，NDRV)，该病毒可引起不同品种鸭(包括番鸭、半番鸭、北京鸭、樱桃谷鸭、麻鸭)及鹅等水禽发病，其特征性病变为肝脾出现严重的坏死和出血(俗称“出血性坏死性肝炎”或“脾出血坏死症”)，该病最早发生于2000年，此后开始在我国广东、福建、浙江、江苏、河北、山东等省相继暴发与流行。流行病学调查研究发现，基因Ⅱ型(NDRV)已成为我国流行的优势基因型。

NDRV基因组由10个节段的双链RNA构成，病毒粒子由二十面体对称的双层衣壳组成，直径70nm、无囊膜。依据SDS-PAGE电泳结果均可将基因组分为3个大片段(命名为L1-3)，3个中片段(命名为M1-3)和4个小片段(命名为S1-4)，其基因组至少可编码10种结构蛋白和4种非结构蛋白。σC蛋白由S1基因节段第3个ORF编码，是构成病毒外衣壳的次要成分。研究表明，σC蛋白与病毒型特异性中和反应的表面抗原有关，能够刺激机体产生保护性中和抗体；且该蛋白位于外衣壳的表面，可通过受体介导识别和附着靶细胞，因此具有受体功能(1、Martínez-Costas J,Grande A,Varela R,et al.1997.Protein architecture ofavian reovirus S1133 and identification of the cell attachment protein[J].Journal of Virology,71(1):59-64.；2、Shapouri M R S,Marième Kane,Letarte M,etal.1995,Cloning,sequencing and expression of the S1 gene of avian reovirus[J].Journal of General Virology,76(6):1515-1520.)。此外，σC蛋白可通过p53依赖性通路诱导宿主细胞凋亡(Shih W L,Hsu H W,Liao M H,et al.2004,Avian reovirussigmaC protein induces apoptosis in cultured cells[J].Virology,321(1):65-74.)。σC在禽呼肠孤病毒(ARV)编码的蛋白中是最易变异的蛋白(1、Liu H J,Giambrone JJ.1997.Amplification,cloning and sequencing of theσC-encoded gene of avianreovirus[J].Journal of Virological Methods,65(2):318-318.；2、Liu H J,Lee L H,Hsu H W,et al.2003.Molecular evolution of avian reovirus::evidence forgenetic diversity and reassortment of the S-class genome segments andmultiple cocirculating lineages[J].Virology,314(1):336-349.)。NDRV、CDRV与ARV均属于禽正呼肠孤病毒种群成员，但NDRVσC蛋白与CDRV及ARV的σC蛋白氨基酸同源性仅分别约40％和30％。目前对NDRVσC蛋白的表位抗原性信息以及是否存在型特异性抗原表位还不清楚。