[发明专利]一种装载溶瘤肽的聚合物囊泡及其与囊泡免疫佐剂、PD-1单抗的联合用药

说明书

本发明公开了一种装载溶瘤肽的聚合物囊泡及其与免疫佐剂、抗体的联合药物与应用。将聚合物溶液与溶瘤肽溶液混合，然后透析，得到装载溶瘤肽的聚合物囊泡；将聚合物溶液与免疫佐剂溶液混合，然后透析，得到装载免疫佐剂的聚合物囊泡。本发明的联合药物系统给药方法能够有效靶向肿瘤处并重塑肿瘤微环境，在增加肿瘤浸润T细胞的同时降低发挥免疫抑制作用的Tsubgt;reg/subgt;，从而显著地增加了IL‑6,TNF‑α和IFN‑γ的含量，并且增加了脾脏中的Tsubgt;CM/subgt;和Tsubgt;EM/subgt;含量，从而实现了强效而长期的免疫记忆。本发明的系统给药方法能够明显地拓宽溶瘤肽和CpG ODNs的使用窗口，为无法瘤内注射的肿瘤或是转移性浸润的肿瘤提供了一种新的治疗方案。

技术领域

本发明属于药物技术，具体涉及装载溶瘤肽LTX-315的聚合物囊泡与囊泡CpGODNs佐剂和PD-1抗体的联合系统递送用于黑色素瘤的免疫治疗。

背景技术

现代生物技术推动了多种多样的多肽药物的发展，其中很大一部分在抗癌药物方面有着出色的潜力。其中，宿主防御肽，或者又被称为阳离子抗菌肽（Cationicantimicrobial peptides, CAPs）能够通过破坏细胞膜以及线粒体膜从而展现出了高效的杀伤癌细胞的能力。有趣的是，LfcinB25和LfcinB6两种多肽在抗菌和抗癌方面展现出了比其亲本蛋白牛乳铁蛋白（BLF）更强的活性。同样来源于乳铁蛋白的LTX-315是一种溶瘤肽，在几个临床前模型中，通过瘤内注射LTX-315能够导致特异性的免疫反应和肿瘤消退，然而根据研究表明，在接受LTX-315治疗后，一些高恶性肿瘤会出现复发或转移，以及肿瘤中PD-L1的表达会出现上调，另外，LTX-315也仅限于瘤内给药，在血液中降解较快，不适用于一些无法通过瘤内给药或转移性的肿瘤。不仅如此，溶瘤肽的阳离子性和两亲性也给开发系统递送带来了巨大的挑战。

这些年来，免疫治疗已经成为了治疗癌症或延缓肿瘤进展的一种极为有效地方式，近年来有多种抗体，包括CTLA-4抗体、PD-1抗体和PD-L1抗体被用于治疗肺癌、黑色素瘤和肝癌并展现出了一定的疗效，然而总体的有效率仅约20~30%。值得注意的是，免疫佐剂CpG ODNs（CpG）用于增强免疫治疗效果，然而，CpG由于其进入细胞的能力较差，通常是在肿瘤内或肿瘤周围注射，限制了其在很多肿瘤中的应用。

发明内容

本发明设计了环肽cRGDfK功能化修饰的、具有不对称膜结构的聚合物囊泡（cRGD-CPs）作为溶瘤肽LTX-315（cRGD-CPs-L）的全身系统递送的高效稳定载体，同时结合囊泡CpG佐剂和PD-1抗体，显著增强了对小鼠恶性B16F10黑色素瘤的免疫治疗的效果。聚合物囊泡是为数不多的能够装载水溶性药物（包括小分子药物、siRNA和蛋白质）并且递送至肿瘤的载体系统之一。为了实现LTX-315和CpG ODNs的有效装载，cRGD-CPs的内壳分别被设计为带有负电荷的聚天冬氨酸和带有正电荷的精胺，通过系统注射cRGD-CPs-L能够有效诱导B16F10黑色素瘤的免疫原性死亡，并且通过与cRGD-CPs-CpG和PD-1抗体的联合，能够实现强免疫应答和长期免疫记忆保护作用，完全治愈率达到约30%。这种通过系统给药注射LTX-315和CpG ODNs的方法大大扩展了它们的应用范围，使其具备了治疗难以瘤内给药和转移性肿瘤的可能性。

本发明采用如下技术方案：