[发明专利]一种用于检测卵巢癌相关基因甲基化的核酸组合物、试剂盒和检测方法

说明书

本发明公开了一种用于检测卵巢癌相关基因甲基化的核酸组合物、试剂盒和检测方法，核酸组合物，包括：RASSF1A基因目的位点的甲基化特异性引物和探针；OPCML基因目的位点的甲基化特异性引物和探针；RUNX3基因目的位点的甲基化特异性引物和探针；TFPI2基因目的位点的甲基化特异性引物和探针；ACTB内参基因的特异性引物和探针；本发明发现的核酸组合物配置成的试剂盒具有检测检测卵巢癌相关基因甲基化结果准确、操作简单、准确性高及敏感性高等优点。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，特别是一种用于检测卵巢癌相关基因甲基化的核酸组合物、试剂盒和检测方法。

背景技术

卵巢癌(Ovarian Cancer)是妇科最常见并严重威胁妇女生命和健康的恶性肿瘤之一，易于转移和广泛播散，其发病率低于子宫颈癌和子宫内膜癌，居妇科恶性肿瘤第3位，但病死率却超过前两者之和，高居妇科癌症之首。其发病十分隐匿，转移前常无症状，手术不能完全清除病灶，再加上术后化疗作用局限，术后复发率高、预后差。世界卫生组织国际癌症研究机构(IARC)发布的2020年全球最新癌症统计数据显示：每年约有31.4万例新发病例，20.7万例死亡病例。卵巢恶性肿瘤组织类型繁多，其中上皮性卵巢癌(EpithelialOvarian Cancer，EOC)最常见，约占80-90％，是目前死亡率最高的妇科恶性肿瘤，高达70％。

目前卵巢癌现有临床筛查、诊断方法可归为三大类：影像学(超声，CT，PET/CT，MRI等)，血清学(血清中肿瘤标志物如CA-125的检测)和病理学(组织活检，细胞学检查等)。但所有这些方法都有不可避免的缺点，例如影像学主要缺陷在于检测结果滞后，对受检者造成放射性伤害；血清学标志物灵敏性及特异性差，细胞学检测和组织活检均有侵入性，造成患者的精神上的紧张和压力，且灵敏度和可重复性都很差，过于依赖医生判断的主观性等。因此，寻找新的无创、精确的检测方法妇科肿瘤的早期诊断和筛查是当前临床上亟待解决的问题。

随着技术上的快速发展，肿瘤分子标志物发展成为继影像诊断、病理诊断之后的肿瘤诊断治疗新的领域，对肿瘤的诊断、监测和治疗产生了重大影响。肿瘤分子标志物可以在体液或组织中检测到，能够反映肿瘤的存在、分化程度、预后估计和判断治疗效果等。目前基因诊断技术不断发展，给卵巢癌的早期诊断带来了希望，其中一个领域就是通过DNA甲基化检测来判断病人是否患有癌症。DNA反常甲基化是肿瘤分子病理改变的一个组成部分，依据DNA反常甲基化的已经成为肿瘤诊断的一个可靠靶标。DNA异常甲基化通常出现在肿瘤发生的早期，因此可以作为肿瘤筛查或诊断的依据。此外，DNA甲基化的“成簇”性出现推动基于液体活检的肿瘤早筛。事实上,目前基于DNA异常甲基化的检测已经成为肿瘤早期诊断、患病风险预测、临床病程监控和疗效评估的最有希望的技术手段。

TFPI-2组织因子途径抑制物-2(Tissue Factor Pathway Inhibitor-2，TFPI-2)，又称胎盘蛋白-5(Placental Protein 5，PP-5)或基质相关性丝氨酸蛋白酶抑制剂(Matrix-associated Serine Protease inhibitor，MSPI)，是一种带有Kunitz型结构域的蛋白酶抑制剂，属于丝氨酸蛋白酶抑制物超家族成员，可能通过影响细胞外基质的重塑参与组织发生、胚胎发育分化、伤口愈合、肿瘤的侵袭转移和动脉粥样硬化斑块破裂等生理病理过程。

RASSF1A(Ras Association Domain Family Member 1)基因编码类似于RAS效应蛋白的蛋白质，是潜在的肿瘤抑制因子。RASSF1A调控的靶基因涉及基因转录、信号转导、细胞骨架、细胞周期、细胞黏附及调亡等多方面内容，具有广泛的生物学作用。而RASSF1A作为一种新型肿瘤抑制基因，其在肿瘤发生及发展过程中的作用尤为重要。目前认为，RASSFIA基因表达失活主要与启动子区异常的高甲基化、杂合性缺失及染色体缺失有关。人类肿瘤中RASSF1A基因失活的频率非常高。例如，RASSF1A基因在70％以上的小细胞肺癌，91％的肾细胞癌，62％的膀胱癌，71％的甲状腺癌，84％的鼻咽癌及70％以上的前列腺癌等中处于高甲基化状态进而失活。