[发明专利]一种封闭区pH调控触发的破骨细胞囊泡及其应用

说明书

本专利发明了一种封闭区pH调控触发的破骨细胞囊泡及其应用。通过对破骨细胞封闭区pH进行调控，可使破骨细胞分泌大量细胞外囊泡，这种囊泡富含RANK，可用于拮抗RANKL，从而达到抑制破骨细胞效果。本发明通过封闭区pH调控触发产生破骨细胞囊泡，机制创新；采用破骨细胞来源的囊泡进行破骨细胞调控，具有自体优势，生物安全性高；效果明确，可有效抑制破骨细胞。

技术领域

本发明属于生物材料领域，具体涉及一种封闭区pH调控触发的破骨细胞囊泡及其应用。

背景技术

细胞外囊泡是由细胞分泌的一类微颗粒，通常携带蛋白质、mRNA、miRNA和脂质等生物活性分子，可实现细胞交互，在细胞的信号传递中起重要作用。尤其是外泌体，已在组织修复领域获得广泛研究，其生物活性分子的作用及机制明确。

破骨细胞封闭区是成熟破骨细胞形成的封闭吸收区，内部pH约为4.5，富含TRAP、CTSK等基质降解酶，在破骨细胞功能行使中起重要作用，同时作为破骨细胞微环境的重要组成部分，其形成机制及影响因素也受到广泛关注。

目前对于破骨细胞细胞外囊泡相关材料的专利十分少见，均停留于异种细胞来源囊泡对破骨细胞的作用。申请号为CN202011412766.2的专利公开了一种靶向破骨细胞的外泌体药物递送系统的制备方法及其应用，从细胞系获取外泌体并包载药物，实现对破骨细胞功能的调控。申请号CN202110034338.9的专利公开了一种肿瘤来源外泌体在制备促进破骨分化和骨溶解药物中的用途，同样只背了肿瘤来源外泌体并进行破骨细胞调控，未进行材料来源和调控机制的创新。诸如此类的专利均限制于异体细胞来源的外泌体材料，生物安全性低。因此需要一种自体细胞来源的破骨细胞囊泡，使其具有高度生物安全性，且机制创新明确。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，提供一种封闭区pH调控触发的破骨细胞囊泡及其应用。通过对破骨细胞封闭区pH进行调控，可使破骨细胞分泌大量细胞外囊泡，这种囊泡富含RANK，可用于拮抗RANKL，从而达到抑制破骨细胞效果。。

为实现上述目的，本发明提供以下技术方案：提取骨髓来源单核巨噬细胞，M-CSF+RANKL诱导破骨细胞，使用药物调控破骨细胞封闭区pH，收集破骨细胞囊泡。

进一步，所述M-CSF浓度为10-50ng/mL，优选地，采用20ng/mL浓度。

进一步，所述RANKL浓度为25-100ng/mL，优选地，采用50ng/mL浓度。

进一步，所述药物调控方式包括培养基pH调控和靶向封闭区pH调控，优选地，采用靶向封闭区pH调控，更优选地，采用碱性内容脂质体调控。

进一步，所述破骨细胞囊泡收集方式包括差速离心法、密度梯度离心法、超滤法、沉淀法、免疫分离法、筛分离法。优选地，采用差速离心+超滤法。

相比现有破骨细胞调控的材料，本发明显著的进步在于：

1)封闭区pH调控触发产生破骨细胞囊泡，机制创新。

2)采用破骨细胞来源的囊泡进行破骨细胞调控，具有自体优势，生物安全性高。

3)效果明确，可有效抑制破骨细胞。

因此，封闭区pH调控触发的破骨细胞囊泡可保证生物安全性和机制创新性，并具有高效性。

附图说明

图1破骨细胞成熟过程中RANK的伴随表达荧光图；

图2破骨细胞成熟过程中RANK的伴随表达蛋白印迹图；

图3封闭区pH调控引起的破骨细胞囊泡的RANK蛋白印迹图；

图4封闭区pH调控引起的破骨细胞囊泡的流式计数；