[发明专利]一种硅基质核酸纯化柱的再生方法

说明书

本发明公开一种硅基质核酸纯化柱的再生方法，具体是将纯化柱浸泡A溶液中并于室温条件轻微搅拌10～15小时，再用自来水冲洗两次，随后将纯化柱浸泡在B溶液中平衡至中性，纯化柱再浸泡在纯净水中于121℃度灭菌15分钟后，于60℃烘箱烘干待用。本方法可以一次性处理大量的纯化柱，纯化柱再生5次，其核酸吸附率保持在95％左右。本方法操作简单，具有经济、高效和环保等优点，适用于市场上常用的硅基质核酸纯化柱的再生和重复利用。

技术领域

本发明属于分子生物学之核酸纯化技术领域，涉及一种实验用的硅基质核酸纯化柱的再生方法，尤其是一种操作简单、条件温和、便于对这类纯化柱的进行大量处理和再生的方法。

背景技术

核酸是生物遗传信息的承载体和传递者，是分子生物学最基本操作对象，核酸提取和纯化是分子生物学实验的重要组成部分。经典的酚-氯仿法提取和纯化核酸不但步骤烦琐，使用到苯酚、氯仿等有毒害的物质，还有多种杂质污染。离心型核酸纯化柱通常由外层的收集管和内层的纯化柱组成的离心型结构，纯化柱上填充的硅基质膜材料能高效、专一地吸附核酸，最大限度去除杂蛋白及细胞中其他杂质。近年来，商品化的硅基质核酸纯化柱(离心柱型)可特异性地吸附核酸DNA和RNA，有效去除杂质污染，具有操作过程简单，不使用有毒害物质等特点，已广泛用于基因组DNA提取、总RNA提取、DNA纯化、DNA胶回收和质粒DNA制备等常见的分子生物学实验。市场上众多的试剂盒中提供的硅基质核酸纯化柱或96孔板都是一次性的，价格昂贵，纯化柱在使用后直接丢弃，既浪费又不利于环保。如果实验室大量使用一次性的核酸纯化柱，大大增加了实验成本。此外，使用过的纯化柱残留有重组DNA或有害的核酸等成分，这些纯化柱未经处理而直接丢弃的话，可能造成对环境的损害或重要DNA的泄漏和污染。

目前，对这类柱子的再生利用已受到一些研究者的关注。Siddappa等(2007)利用1M盐酸浸泡核酸纯化柱，可有效去除残留的DNA，但处理时间长。Tagliavia等(2009)、姜王声等(中国专利200910220752.8)、韩寒(中国专利201010149814.3)和熊明华等(2015)主要以碱液或酸液相继处理污染基因组DNA的核酸纯化柱，能有效去除柱子上的核酸残留，但这些方法使用到较高浓度的有腐蚀性的强酸强碱(NaOH、H₂SO₄、HCl)成分和65℃的水浴条件，存在安全隐患，处理液的后期排放也不利于生态环保。刘传青等(2014)等将使用过的DNA纯化柱放在pH 2.4的0.01mol/L磷酸缓冲液中，在4℃低温条件处理6天，纯化柱对同一质粒的再吸附能力有所提高，但没有考虑核酸残留对提取其它核酸的污染情况，其处理方法需要低温条件，耗时长。中国专利(专利号：201110294478.6)公开一种硅质膜离心吸附柱再生液及其使用方法，其处理方法条件温和，生态环保，但其再生液成分复杂，操作烦琐，不适合大量处理和再生这类核酸纯化柱。

发明内容

本发明提供一种硅基质核酸纯化柱的再生方法，通过食品级的柠檬酸和一种温和的去污剂Trition X-100的共同作用，将纯化柱上的硅基质膜及其管内壁上残留的核酸进行降解和清除，再通过低浓度的Tris-HCl缓冲液处理，达到消除残留核酸和恢复柱子吸附能力的目的。本方法具有处理条件温和，操作简单，无需使用强酸强碱试剂，具有生态环保等优点，可以一次性处理和再生大量的这类核酸纯化柱。本发明再生5次的纯化柱，其核酸吸附率保持在95％左右，而且其在提取和纯化其它的核酸，并不影响后续的相关实验。本发明方法适用于目前市场上常用硅基质核酸纯化柱，再生的纯化柱包括硅基质DNA纯化柱和硅基质RNA纯化柱，只是在柱子再生时将DNA纯化柱和RNA纯化柱分开进行处理即可。

本发明解决上述技术问题的技术方案如下：

本发明所述的核酸纯化柱再生方法所需的溶液，A溶液和B溶液用去离子水现配现用，所述的A溶液为含有2％～4％(W/V)柠檬酸(食品级)和0.025％～0.1％(V/V)的TritionX-100混合溶液，所述的B溶液为5～10mM Tris-HCl(pH 8.0)缓冲液。