[发明专利]一种检测大肠埃希菌O157的分离培养基及其制备方法

说明书

本发明提供了一种检测大肠埃希菌O157的分离培养基及其制备方法。该检测大肠埃希菌O157的分离培养基包括示蛋白胨、鼠李糖、肌醇、山梨醇、蛋白胨、琼脂、3号胆盐、中性红、结晶紫、亚碲酸钾、头孢克肟和β‑半乳糖苷酶显色底物。本发明提供的分离培养基中添加了示蛋白胨、鼠李糖、肌醇、山梨醇和5‑溴‑4‑氯‑3‑吲哚‑β‑半乳糖苷，并优化了各个组分的含量，不仅降低了假阳性率，同时通过颜色的差异快速辨别大肠埃希菌O157:H7，提高了培养基的特异性且成本未有显著增加。

技术领域

本发明涉及微生物检测技术领域，尤其涉及一种检测大肠埃希菌O157的分离培养基及其制备方法。

背景技术

大肠埃希菌O157:H7/HM是一种严重危害人类健康的食源性致病菌，可导致非血性腹泻、出血性结肠炎、溶血性尿毒综合症，甚至死亡。该菌也是肠道出血性或产志贺毒素大肠埃希菌(EHEC或STEC)中最主要的致病血清型。大肠埃希菌O157:H7/HM能够感染肉类、蔬菜、牛奶、果汁和饮用水等多种食品，已在全球多个国家引发了食品安全问题，因此大肠埃希菌O157：H7/HM的检测愈发受到关注。随着免疫学、生物化学、分子生物学的不断发展，许多检验方法如磁珠富集、免疫法、DNA探针技术等已在大肠埃希菌O157:H7的检测中不断得到扩大应用，但这些方法需要较高的技术且仪器试剂的成本较高，因此高效经济的分离培养基仍具有广大的应用需求。

比较国内外检测标准，改良山梨麦康凯(CT-SMAC)和大肠埃希菌O157显色培养基是常规培养法中应用较多的分离培养基。显色培养基中的酶显色底物是由特异性酶识别基团以及相应的显色基团两部分组成，用于大肠埃希菌O157:H7检测的显色集团主要成分为苯酚衍生物，如5-溴-6-氯-3-吲哚-β-半乳糖苷、5-溴-6-氯-3-吲哚-β-葡萄糖苷、8-羟基喹啉基-β-D-吡喃葡萄糖醛酸钠盐、5-溴-4-氯-3-吲哚-β-半乳糖苷等。目前市售的大肠埃希菌O157显色培养基一般都添加了两种或两种以上不同的酶底物，成本相对较高。

改良山梨麦康凯(CT-SMAC)培养基价格经济受到青睐，其原理是大肠埃希菌O157不发酵或迟缓发酵培养基中的山梨醇，显示为无色菌落，而发酵山梨醇的微生物通过发酵产酸并在pH指示剂中性红作用下显示为品红色。但是实际检测中一些肠杆菌、变形杆菌等微生物不发酵山梨醇显示为无色菌落；另外，微生物对山梨醇发酵速率不一致，导致在观察时间范围内菌落的红色褪去也显示为无色菌落，这些因素都干扰了大肠埃希菌O157:H7/HM的检出。

因此，目前需要对大肠埃希菌O157:H7/HM的分离培养基进行改进。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供了一种检测大肠埃希菌O157的分离培养基及其制备方法，该分离培养基经济且具有较高的鉴别能力。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

本发明的第一方面是提供一种检测大肠埃希菌O157的分离培养基，包括示蛋白胨、鼠李糖、肌醇、山梨醇、蛋白胨、琼脂、3号胆盐、中性红、结晶紫、亚碲酸钾、头孢克肟和β-半乳糖苷酶显色底物。

进一步地，上述分离培养基包括如下含量的组分：示蛋白胨1-9g/L，鼠李糖1-9g/L，肌醇1-9g/L，山梨醇10-18g/L，蛋白胨15-30g/L，琼脂10-20g/L，3号胆盐1-2g/L，中性红0.01-0.05g/L，结晶紫0.3-1.2mg/L，亚碲酸钾2-3mg/L，头孢克肟0.01-0.08mg/L，β-半乳糖苷酶显色底物0.01-0.02g/L。

进一步地，上述分离培养基包括如下含量的组分：示蛋白胨1-9g/L，鼠李糖1-9g/L，肌醇1-9g/L，山梨醇10-18g/L，蛋白胨20g/L，琼脂15g/L，3号胆盐1.5g/L，中性红0.03g/L，结晶紫1mg/L，亚碲酸钾2.5mg/L，头孢克肟0.05mg/L，β-半乳糖苷酶显色底物0.01-0.02g/L。

进一步地，在上述分离培养基中，示蛋白胨的含量为5g/L。