[发明专利]一种快速获取大体积样本三维数据的光透明方法

权利要求书

1.一种快速获取大体积生物样本三维数据的方法，其特征在于：包括如下步骤：

S1、第一次浸没步骤，将生物样本组织浸入光透明溶液中进行预处理，得到预处理后的生物样本组织；

S2、包埋步骤，将经过步骤S1预处理后的生物样本组织进行琼脂糖包埋，得到包埋后的生物样本组织；

S3、第二次浸没步骤，将经过步骤S2包埋后的生物样本组织再次浸泡于光透明溶液中；

S4、样本安装步骤，将包埋后的生物样本组织固定于样本槽内，并将所述样本槽固定于三维移动平台上；在所述样本槽中倒入所述光透明溶液直至淹没所述生物样本组织、显微物镜、用于切削的刀具，透明化所述生物样本组织的浅层表面；

S5、光学成像步骤，移动三维移动平台将生物样本组织移动至物镜下，控制光学显微成像模块对所述生物样本组织的浅层表面进行显微光学成像，并存储所得到的图像；

S6、切片步骤，将所述生物样本组织在所述光透明溶液中进行切片，使所述光透明溶液实时透明化经切片后新暴露的所述生物样本组织的表面；

循环交替进行S5和S6，直至获得所述生物样本组织的三维图像；

其中所述光透明溶液包括如下质量百分比的原料：

20-40%的糖或醇或糖醇类化合物；

10-30%的尿素；

0-30%的促渗剂，其他为水。

2.根据权利要求1所述的一种快速获取大体积样本三维数据的光透明方法，其特征在于：在进行步骤S1之前对生物样本组织进行荧光标记。

3.根据权利要求1所述的一种快速获取大体积样本三维数据的光透明方法，其特征在于：所述步骤S1具体包括，将所述生物样本组织浸入光透明溶液中至少24小时。

4.根据权利要求1所述的一种快速获取大体积样本三维数据的光透明方法，其特征在于：所述步骤S2具体包括将所述生物样本组织浸入具有琼脂糖溶液的模具中，将模具保持在45-55℃的温度区间，使得所述生物组织样本与所述琼脂糖溶液充分接触并交联至少30分钟，再取出模具自然冷却30分钟后取出包埋后的所述生物样本组织。

5.根据权利要求1所述的一种快速获取大体积样本三维数据的光透明方法，其特征在于：所述步骤S3具体包括，将包埋好的生物样本组织再次浸入所述光透明溶液中至少24小时。

6.根据权利要求1所述的一种快速获取大体积样本三维数据的光透明方法，其特征在于：所述步骤S5中的最大切削次数为N=H/d，H为样本高度，d为切片厚度，切片厚度为20-100um。

7.根据权利要求1所述的一种快速获取大体积样本三维数据的光透明方法，其特征在于：在循环交替进行步骤S5和S6时，所述步骤S6之前还包括一个检测步骤，检测切片次数是否达到最大切削次数，若达到最大切削次数，则完成整个数据采集。

8.根据权利要求1所述的一种快速获取大体积样本三维数据的光透明方法，其特征在于：所述糖为果糖、葡萄糖、蔗糖的一种或多种。

9.根据权利要求1所述的一种快速获取大体积样本三维数据的光透明方法，其特征在于：所述醇为甘油、聚乙二醇的一种或多种。

10.根据权利要求1所述的一种快速获取大体积样本三维数据的光透明方法，其特征在于：所述糖醇类化合物为山梨醇、木糖醇的一种或多种。

11.根据权利要求1所述的一种快速获取大体积样本三维数据的光透明方法，其特征在于：所述促渗剂选自二甲基亚砜或丙二醇。