[发明专利]一种检测犬冠状病毒和犬细小病毒的核酸组合物、试剂盒及应用

说明书

本发明公开了一种检测犬冠状病毒和犬细小病毒的核酸组合物、试剂盒及应用，涉及病原体检测技术领域。其包括用于检测犬冠状病毒的第一核酸组合物和用于检测犬细小病毒的第二核酸组合物，该组合物可以用于犬消化道病毒实时荧光定量PCR的检测，经发明人验证该核酸组合物检测病原体的特异性好，且灵敏度高，对于两种病原体的最低检测限均达到5×10²copies/mL，有利于患犬的早期诊断或治疗。基于上述核酸组合物可以制备相应的检测试剂盒以及检测试剂。

技术领域

本发明涉及病原体检测技术领域，具体而言，涉及一种检测犬冠状病毒和犬细小病毒的核酸组合物、试剂盒及应用。

背景技术

病毒性肠炎是引起6月龄以下犬的传染性腹泻的最常见原因之一。犬冠状病毒(Canine coronavirus,CCoV或CCV)和犬细小病毒(Canine Parvovirus,CPV)已被确认为是引起犬病毒性肠炎的主要病原体。其中，犬细小病毒传染性强、发病率高，且对环境及常见消毒剂具有较强的抵抗力。而犬冠状病毒为单链RNA病毒，具有囊膜，对热、去污剂等较为敏感。犬感染CCV或CPV后，可表现出不同程度的胃肠道症状，初期以呕吐为主，随着病情的发展可出现糊状、半糊状、水样腹泻，CPV还可引起番茄汁样腥臭粪便，后迅速出现脱水。病犬和康复犬均可带毒，病原主要经消化道传播，且常以混合感染的形式出现，当犬冠状病毒和犬细小病毒混合感染犬时，患犬可出现严重的出血性肠炎，导致患犬的死亡率显著升高。而快速、准确地确定引起犬消化道疾病的病原体种类，对于患犬的临床鉴别诊断及治疗有着重要的意义。

目前临床中最常用诊断方法为胶体金检测或普通PCR检测。例如专利CN201711054378.X提供了一种犬冠状病毒抗体快速定量检测卡及使用方法，胶体金法存在检测灵敏度低的问题；普通PCR的灵敏度虽然较高，但检测的病原体单一。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种检测犬冠状病毒和犬细小病毒的核酸组合物、试剂盒及应用以解决上述技术问题。

本发明是这样实现的：

本发明提供了一种检测犬冠状病毒和犬细小病毒的核酸组合物，其包括用于检测犬冠状病毒的第一核酸组合物和用于检测犬细小病毒的第二核酸组合物，第一核酸组合物包括引物对1和探针1，引物对1的核苷酸序列具有与SEQ ID NO.1-2所示的序列至少80％的一致性，探针1的核苷酸序列具有与SEQ ID NO.3所示的序列至少80％的一致性，第二核酸组合物包括引物对2和探针2，引物对2的核苷酸序列具有与SEQ ID NO.4-5所示的序列至少80％的一致性，探针2的核苷酸序列具有与SEQ ID NO.6所示的序列至少80％的一致性。

在本发明应用较佳的实施方式中，上述引物对1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1-2所示，探针1的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，引物对2的核苷酸序列如SEQ ID NO.4-5所示，探针2的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。

在本发明应用较佳的实施方式中，上述探针1和探针2的5’端均标记有荧光报告基团，3’端均标记有荧光淬灭基团。

在本发明应用较佳的实施方式中，上述荧光报告基团为HEX、FAM、TET、CF532、JOE、TAMRA、ROX、CY3、CY5、Texas Red、NED、Alexa Flour或VIC，淬灭基团为MGB、TAMRA、BHQ1、BHQ2、BHQ3或QSY。

本发明提供了一种检测试剂盒，其包括上述的核酸组合物。

本发明提供了一种上述核酸组合物在制备检测试剂盒中的应用。

本发明提供了一种试剂，其包括上述的核酸组合物。

在本发明应用较佳的实施方式中，上述试剂为冻干试剂或液体试剂。