[发明专利]重组微生物及其制备方法和应用

权利要求书

1.蛋白突变体，其特征在于，其为转酮酶突变体和/或3-脱氧-D-阿拉伯庚酮糖酸-7-磷酸合成酶突变体，

其中，所述转酮酶突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，

所述3-脱氧-D-阿拉伯庚酮糖酸-7-磷酸合成酶突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.编码权利要求1所述的蛋白突变体的核酸。

3.含有权利要求2所述的核酸的生物材料，所述生物材料为表达盒、载体或谷氨酸棒杆菌。

4.权利要求1所述的蛋白突变体或权利要求2所述的核酸或权利要求3所述的生物材料在生产谷氨酸中的应用。

5.一种重组谷氨酸棒杆菌，其特征在于，所述重组谷氨酸棒杆菌表达转酮酶突变体和/或3-脱氧-D-阿拉伯庚酮糖酸-7-磷酸合成酶突变体，且不表达其出发菌株所具有的转酮酶和/或3-脱氧-D-阿拉伯庚酮糖酸-7-磷酸合成酶；

所述转酮酶突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；

所述3-脱氧-D-阿拉伯庚酮糖酸-7-磷酸合成酶突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；

所述重组谷氨酸棒杆菌的出发菌株为能够积累谷氨酸的谷氨酸棒杆菌。

6.根据权利要求5所述的重组谷氨酸棒杆菌，其特征在于，所述重组谷氨酸棒杆菌中编码转酮酶的基因突变为编码所述转酮酶突变体的基因，和/或，所述重组谷氨酸棒杆菌中编码3-脱氧-D-阿拉伯庚酮糖酸-7-磷酸合成酶的基因突变为编码所述3-脱氧-D-阿拉伯庚酮糖酸-7-磷酸合成酶突变体的基因。

7.权利要求5或6所述的重组谷氨酸棒杆菌的构建方法，其特征在于，包括：将携带编码转酮酶突变体和/或3-脱氧-D-阿拉伯庚酮糖酸-7-磷酸合成酶突变体的基因的重组质粒导入出发菌株中，将出发菌株中编码转酮酶的基因突变为编码所述转酮酶突变体的基因，和/或将出发菌株中编码3-脱氧-D-阿拉伯庚酮糖酸-7-磷酸合成酶的基因突变为编码所述3-脱氧-D-阿拉伯庚酮糖酸-7-磷酸合成酶突变体的基因。

8.权利要求5或6所述的重组谷氨酸棒杆菌在谷氨酸生产中的应用。

9.一种生产谷氨酸的方法，其特征在于，包括将权利要求5或6所述的重组谷氨酸棒杆菌进行发酵培养的步骤。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述发酵培养基包括如下组分：葡萄糖50-60g/L，硫酸铵10-20g/L，KH₂PO₄ 0.5-1.5g/L，MgSO₄·7H₂O 0.2-0.5g/L，FeSO₄·7H₂O0.05-0.15mg/L，MnSO₄·5H₂O 0.8-1.2mg/L，VB₁ 150-250μg/L，生物素250-350μg/L，大豆水解液0.3-0.6g/L，pH 7.2-7.5，

或者，所述发酵培养基包括如下组分：葡萄糖15-25g/L，玉米浆15-25g/L，盐酸盐甜菜碱0.1-0.3g/L，K₂HPO₄ 6-8g/L，MgSO₄·7H₂O1-2g/L，V_B1 150-250μg/L，V_H 550-650μg/L，FeSO₄·7H₂O 25-35mg/L、MnSO₄·H₂O 25-35mg/L，尿素0.4-0.7g/L，pH 7.2-7.5。