[发明专利]一种β-乳球蛋白的抗原表位肽、完全抗原、抗体以及测定β-乳球蛋白残留量的方法有效
申请号: | 202110602455.0 | 申请日: | 2021-05-31 |
公开(公告)号: | CN113549141B | 公开(公告)日: | 2023-03-28 |
发明(设计)人: | 丛艳君;刘迪 | 申请(专利权)人: | 北京工商大学 |
主分类号: | C07K14/47 | 分类号: | C07K14/47;C07K16/18;G01N33/68;G01N33/577 |
代理公司: | 北京易捷胜知识产权代理有限公司 11613 | 代理人: | 齐胜杰 |
地址: | 100048*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 球蛋白 抗原 表位肽 完全 抗体 以及 测定 残留 方法 | ||
1.一种β-乳球蛋白的抗原表位肽,其特征在于,所述抗原表位肽的氨基酸序列为CGAQALIVTQTMKGLDIQKVAGTWYS。
2.一种根据权利要求1所述的抗原表位肽和牛血清蛋白偶联得到的完全抗原。
3.根据权利要求2所述的完全抗原,其特征在于,所述完全抗原通过戊二醛法偶联制备。
4.一种多克隆抗体,其特征在于,所述多克隆抗体以权利要求2或权利要求3所述的完全抗原为抗原经过免疫兔或羊制备得到。
5.一种测定β-乳球蛋白残留量的方法,其特征在于,包括如下步骤:
S1:合成β-乳球蛋白作用表位肽,所述β-乳球蛋白作用表位肽的氨基酸序列为CGAQALIVTQTMKGLDIQKVAGTWYS;
S2:将步骤S1合成的β-乳球蛋白作用表位肽与牛血清蛋白进行偶联,制备得到完全抗原;
S3:以步骤S2制备的完全抗原为抗原,制备得到单克隆抗体;
或者:
以步骤S2制备的完全抗原为抗原,制备得到多克隆抗体;
S4:以步骤S3制备得到的单克隆抗体或者多克隆抗体为一抗,采用间接竞争ELISA方法检测不同蛋白酶水解β-乳球蛋白的水解液中β-乳球蛋白残留量。
6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,步骤S4中,采用间接竞争ELISA方法检测时,
如果以作用表位的完全抗原免疫制备的单抗为测定用的一抗,其稀释倍数为5000-10000倍;酶标二抗的稀释倍数为500-2000倍;
如果以作用表位的完全抗原免疫制备的多克隆抗体为测定用的一抗,其稀释倍数为200-300倍;酶标二抗的稀释倍数为500-2000倍。
7.根据权利要求6所述的方法,其特征在于,步骤S4中,
所述酶标二抗为HRP-羊抗鼠IgG或者HRP-羊抗兔IgG。
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