[发明专利]用于创伤弧菌检测的RAA引物组、crRNA序列及RAA-CRISPR方法

说明书

本发明属于基因检测技术领域，具体涉及一种用于创伤弧菌检测的RAA引物组、特异性crRNA、试剂盒及检测方法。本发明设计并筛选了创伤弧菌RAA的扩增引物以及crRNA序列，提出了基于RAA‑CRISPR系统构建一种新型创伤弧菌检测方法，可以实现对创伤弧菌的简便、快速、准确检测。

技术领域

本发明属于基因检测技术领域，具体涉及一种用于创伤弧菌检测的RAA引物组、特异性crRNA、试剂盒及检测方法。

背景技术

创伤弧菌是一类革兰氏阴性人畜共患致病菌，能在牡蛎、对虾等水产品内大量繁殖，对相关养殖产业造成沉重经济损失的同时也严重影响养殖人员、消费者等人身安全。创伤弧菌也是一种病死率较高的致病菌，因食源性感染导致的病死率高达50%，而由伤口感染导致的病死率也有25%左右。临床病例研究发现，发病后及时给予治疗将显著降低患者病死率。然而，及时治疗的关键，是快速、准确的检测。此外，为便于在床旁、户外以及资源匮乏地区进行检测，简单、便携的方法备受青睐。因此，开发一种简便、快速、准确的创伤弧菌检测方法具有重要的现实意义。

目前，用于创伤弧菌检测的方法为qRT-PCR，但该方法需要专业仪器和熟练操作人员，限制了其在户外和资源匮乏地区的应用。随着核酸扩增技术的发展，无需专业仪器、耗时短、在恒温条件下即可进行的重组酶介导等温核酸扩增技术（RAA）应运而生，有望用于即时检测。然而，这种技术也存在一定局限性，扩增产物常需纯化、电泳分析以判定检测结果，加重了气溶胶污染问题，提高了假阳性风险。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术存在的缺点和不足，而提供一种用于创伤弧菌检测的RAA引物组、特异性crRNA、试剂盒及检测方法。

本发明所采取的技术方案如下：用于创伤弧菌检测的RAA引物组，其为RAA-F1和RAA- R1构成的引物对或RAA-F2和RAA-R2构成的引物对；

RAA-F1的序列如SEQ ID NO.1所示；

RAA- R1的序列如SEQ ID NO.2所示；

RAA-F2的序列如SEQ ID NO.3所示；

RAA-R2的序列如SEQ ID NO.4所示。

其为RAA-F2和RAA-R2构成的引物对。

一种用于创伤弧菌检测的特异性crRNA，其为crRNA1、crRNA2、crRNA3、crRNA4中的一种或多种；

crRNA1的序列如SEQ ID NO.5所示；

crRNA2的序列如SEQ ID NO.6所示；

crRNA3的序列如SEQ ID NO.7所示；

crRNA4的序列如SEQ ID NO.8所示。

其为crRNA3和crRNA4的混合。

一种用于创伤弧菌检测的试剂盒，包括RAA引物组、特异性crRNA、Cas12a蛋白、荧光探针；

其中RAA引物组为RAA-F1和RAA- R1构成的引物对或RAA-F2和RAA-R2构成的引物对；

RAA-F1的序列如SEQ ID NO.1所示；

RAA- R1的序列如SEQ ID NO.2所示；

RAA-F2的序列如SEQ ID NO.3所示；

RAA-R2的序列如SEQ ID NO.4所示；

特异性crRNA为crRNA1、crRNA2、crRNA3、crRNA4中的一种或多种；

crRNA1的序列如SEQ ID NO.5所示；

crRNA2的序列如SEQ ID NO.6所示；

crRNA3的序列如SEQ ID NO.7所示；

crRNA4的序列如SEQ ID NO.8所示。