[发明专利]用于无抗生素发酵制备低分子量物质和蛋白质的微生物菌株和方法

权利要求书

1.用于生产低分子量物质或蛋白质的微生物菌株，其基因组中含有基因中的突变，该突变在菌株中引起营养缺陷，所述菌株还含有编码至少一种酶或者至少一种重组蛋白以及所述基因的功能性拷贝的生产质粒，所述酶用于生产低分子量物质，所述基因的染色体失活引起营养缺陷，特征在于营养缺陷是不可补足的营养缺陷，且所述基因是plsC基因或其同源基因。

2.权利要求1的微生物菌株，特征在于在菌株中引起不可补足的营养缺陷的基因突变导致所述基因失活。

3.权利要求1或2的微生物菌株，特征在于在所述菌株中引起不可补足的营养缺陷的基因突变导致所述基因编码的基因产物的活性失活。

4.产生权利要求1-3任一项的微生物菌株的方法，特征在于将温度敏感型质粒导入微生物菌株，其具有能够通过突变或缺失转变为在菌株中引起不可补足的营养缺陷的基因的基因，所述温度敏感型质粒具有待突变或缺失的基因的功能性拷贝，然后突变所述菌株的基因组，由此所述菌株在所述基因中具有导致菌株中不可补足的营养缺陷的突变，及所述基因的功能性拷贝存在于温度敏感型质粒上，然后在所述菌株中在非许可温度用生产质粒交换所述温度敏感型质粒，其中所述生产质粒含有编码用于产生低分子量物质的酶或重组蛋白质的基因，以及引起营养缺陷的基因的功能性拷贝，其中所述基因是plsC基因或其同源基因。

5.权利要求4的方法，其特征在于所述温度敏感型质粒具有温度敏感的复制起点。

6.权利要求5的方法，特征在于细胞在用所述生产质粒转化后立即暴露于47-55℃的温度休克30-90分钟，并且随后在37-45℃的非许可温度进行进一步的温育。

7.在发酵培养基中用微生物菌株生产低分子量物质或蛋白质的方法，所述方法的特征在于使用权利要求1-3的一或多项的微生物菌株及使用无抗生素发酵培养基。