[发明专利]一种坚强芽孢杆菌及其在降解萘、蒽、菲、芴中的应用

说明书

本发明涉及微生物技术领域，具体涉及坚强芽孢杆菌及其在四种多环芳烃降解中的应用，所述的坚强芽孢杆菌(Bacillus firmus)，购买于“中国普通微生物菌种保藏管理中心”，保藏号为CGMCC【1.16095】。所选多环芳烃为萘、蒽、菲、芴。结果表明坚强芽孢杆菌能在有氧条件下利用四种多环芳烃作为唯一碳源进行生长，坚强芽孢杆菌对菲和芴降解性能良好，坚强芽孢杆菌菲和芴的降解率分别为54.66％和54.22％。本发明筛选的菌株可为开展多种多环芳烃降解的降解机理研究提供新的种质资源。

技术领域

本发明属于环境有机污染物生物处理技术领域，尤其是涉及一种坚强芽孢杆菌及其在降解萘、蒽、菲、芴中的应用。

背景技术

作为促进国家经济和社会发展的重要能源，石油在为人类带来利益的同时也造成了严重的环境污染，而石油芳香烃物质中以多环芳香烃(PAHs)对环境污染威胁最大，建立高效、环保的方法对其进行降解一直是一个重要的研究课题。近年来，微生物降解污染物因其良好的环境和经济效益而受到人们的关注，本发明选取了具备降解多环芳烃潜力的坚强芽孢杆菌(Bacillus firmus)，利用其对萘、蒽、菲、芴四种多环芳烃进行降解实验以确定其降解能力，以期为开展多种多环芳烃降解的降解机理研究提供新的种质资源。

发明内容

本发明是为了克服现有多环芳烃降解菌群种类不明确及缺少降解率的问题，从中国普通微生物菌种保藏管理中心(http://www.cgmcc.net/)购买了一株分离自青海油田采油三厂的坚强芽孢杆菌Bacillus firmus)，保藏号为CGMCC【1.16095】，利用其进行多环芳烃降解实验，证实该菌株对萘、蒽、菲、芴四种多环芳烃均具有较高的降解效率，降解效果良好且环保。

为实现上述目的，本发明的技术方案如下：一种坚强芽孢杆菌在降解多环芳香烃中的应用,所述的坚强芽孢杆菌(Bacillus firmus)，购买于“中国普通微生物菌种保藏管理中心”，保藏号为CGMCC【1.16095】。

上述的应用，所述的多环芳香烃是萘、蒽、菲、芴中的一种或多种。

本发明所提供的多环芳烃降解菌分离自青海油田采油三厂，在中国普通微生物菌种保藏管理中心保藏，编号为CGMCC【1.16095】，该菌为坚强芽孢杆菌Bacillus firmus，革兰氏阳性。

坚强芽孢杆菌能利用萘、蒽、菲、芴作为唯一碳源和能源生长繁殖，在纯培养条件下，坚强芽孢杆菌对无机盐培养基中50mg/L的菲和芴的降解率均在50％以上。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但发明的实施方式不限于此。

实施例1坚强芽孢杆菌在多环芳烃体系中的生长性能

①用75％酒精脱脂棉对装有坚强芽孢杆菌冻干菌体安瓿外表面进行消毒后，用火焰加热其顶端，滴少量无菌水至加热的安瓿顶端使之破裂(应避免过多水蒸汽影响菌种复苏)，用镊子敲下已经破裂的安瓿顶端，用无菌吸管吸取约0.3mL对应的牛肉膏蛋白胨液体培养基(表1，不加琼脂)，加入到安瓿内，轻轻震荡，使冻干菌体溶解呈悬浮状。吸取全部菌悬液，移植于牛肉膏蛋白胨培养基(表1)试管中，置于30℃恒温培养至长出菌落，说明菌株活化成功。活化成功的菌株通过传代培养。

表1实验所用菌株及活化培养基

②将活化成功的菌种接入LB富集培养基，用生物封口膜包好瓶口隔绝杂菌，置于30℃、150r/min的恒温振荡培养箱内培养16-20h至对数期。

③采用分析天平准确称取50mgPAHs标准品(萘、蒽、菲、芴)，放入洁净的烧杯中，用色谱级甲醇溶解，将溶液移入100mL规格的容量瓶中，用甲醇定容至刻度线，摇匀，即得到500mg/L的PAHs(萘、蒽、菲、芴)的母液。