[发明专利]PRRSV核衣壳蛋白的猪源单个B细胞抗体及竞争ELISA抗体检测试剂盒

说明书

本发明提供了猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)核衣壳蛋白(N)的猪源单个B细胞抗体及竞争ELISA抗体检测试剂盒，属于病毒检测技术领域。本发明提供了PRRSVN蛋白的猪源单个B细胞抗体C8。试验表明以FMDV的3A表位单抗3A24作为包被抗体，捕获3AN融合蛋白后形成包被酶标板，以C8单抗作为检测抗体，采用竞争ELISA反应模式检测猪血清PRRSV抗体，制备的PRRSV抗体检测试剂盒，具有很好的敏感性和特异性，为PRRSV血清流行病学调查提供了一种新工具。

技术领域

本发明属于病毒检测技术领域，具体为PRRSV核衣壳蛋白的猪源单个B细胞抗体C8及竞争ELISA试剂盒。

背景技术

猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndromevirus,PRRSV)引起的一种高度接触性传染病，临床症状主要是以母猪的繁殖障碍，仔猪呼吸道症状以及哺乳仔猪的高死亡率为特征。该病对全球养猪业造成了极大的经济损失，是目前影响养猪业健康发展的重要的疫病之一。PRRSV是一种有囊膜的单股正链RNA病毒，极易发生变异，流行毒株众多，而商品化弱毒疫苗的使用，也会导致流行毒与疫苗毒重组现象的发生，造成PRRS防控难度加大。

目前，我国PRRS的防控主要依靠弱毒疫苗免疫和严格的生物安全措施。在感染早期对该病快速准确的检测，有利于最大限度的控制PRRS的流行。ELISA检测技术是检测PRRSV抗体的常用方法，检测的靶标多为N蛋白抗体，通过检测抗体可以对群体感染或免疫状况作出判断。N蛋白是PRRSV的核衣壳蛋白，具有高度的保守性和极强的免疫原性，感染后7天即可在血清中检测到N蛋白抗体，因此，N蛋白抗体是PRRS感染状况监测评估的主要指标。通常可以从自然宿主与非自然宿主分离抗原特异性单个B细胞研制单克隆抗体，而从自然宿主分离抗原特异性单个B细胞产生的单克隆抗体相对于非自然宿主制备的单克隆抗体，更易识别病毒抗原中存在的自然抗原表位，因而具有更佳的应用效果，然而即便从自然宿主分离抗原特异性单个B细胞抗体在识别PRRSV抗原的特异性方面也存在差别，因此，提供一种抗原特异性单个B细胞抗体对制备ELISA检测试剂盒至关重要。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白的猪源单个B细胞抗体，对猪繁殖与呼吸综合征病毒具有较高的结合特异性。

本发明的目的还在于提供一种猪繁殖与呼吸综合征病毒竞争ELISA抗体检测试剂盒，用于PRRS感染或免疫状况的监测。

本发明提供了一种猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白的猪源单个B细胞抗体C8，所述猪源单个B细胞产生的单克隆抗体C8包括氨基酸序列如SEQ ID No.1所示的重链可变区基因HV1和氨基酸序列如SEQ ID No.2所示的轻链可变区基因LV1。

本发明提供了一组猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白的猪源单个B细胞抗体与口蹄疫病毒3A蛋白单抗的抗体组合物，包括所述猪源单个B细胞抗体C8和口蹄疫病毒3A蛋白的单克隆抗体3A24。

本发明提供了所述猪源单个B细胞抗体C8或所述抗体组合物在制备检测猪繁殖与呼吸综合征病毒感染或免疫动物后N蛋白抗体的试剂或试剂盒中的应用。

优选的，所述免疫检测包括胶体金免疫检测、免疫沉淀检测、荧光免疫检测和/或酶联免疫检测。

本发明提供了一种猪繁殖与呼吸综合征病毒的竞争ELISA抗体检测试剂盒，包括所述猪源单个B细胞抗体C8或所述抗体组合物。

优选的，还包括抗原反应板、100×浓缩生物素标记抗体、100×浓缩酶标亲和素、25倍浓缩洗涤液、血清稀释液、底物溶液、终止液、阳性对照血清和阴性对照血清。

优选的，所述抗原反应板是预先包被单克隆抗体3A24再结合3A单抗包被捕获3AN融合蛋白制备得到；