[发明专利]一种与猪鼻支原体特异性结合的核酸适体及其应用

说明书

本发明公开了一种与猪鼻支原体特异性结合的核酸适体及其应用。该适体特异性强，灵敏度高，能够靶向结合猪鼻支原体、靶向结合猪鼻支原体感染的细胞；作为检测猪鼻支原体感染的试剂、作为检测猪鼻支原体感染细胞的试剂以及作为检测猪鼻支原体感染细胞体内活体成像的试剂。本发明为肿瘤的检测、诊断和治疗提供了新的方法和途径。

技术领域

本发明属于肿瘤微生物学技术领域，涉及靶向识别猪鼻支原体的核酸适体及其在靶向结合猪鼻支原体、猪鼻支原体感染的细胞；作为检测猪鼻支原体感染的试剂、检测猪鼻支原体感染细胞的试剂、检测猪鼻支原体感染细胞体内活体成像的试剂中的应用。

背景技术

恶性肿瘤是一类生物体内正常细胞在众多内因和外因作用下，出现过度增殖、转移和浸润等现象，从而危害人体正常器官功能并导致死亡的一种恶性疾病。肿瘤的发生因素包括宿主的遗传因素以及外部的物理、化学和微生物等诱因。据已有的研究报道，病原微生物的感染是造成肿瘤发生发展的一个重要外部因素，16％的人类癌症可归因于病原微生物的感染，如幽门螺旋杆菌引起胃癌、乙型肝炎病毒促发肝癌、EB病毒诱发鼻咽癌，病原微生物的定植可诱发细胞的基因突变、蛋白表达变化、细胞形态变化乃至细胞发生恶性转变、异常增殖、迁移和侵袭能力增加等现象。

猪鼻支原体是一种最初发现于猪呼吸道中的正常菌群，在特定条件下可引发猪肺炎、浆膜炎、关节炎、咽鼓管炎以及中耳炎，但近年来，发现其与人类肿瘤的发生发展有密切联系，根据报道，通过特异性识别猪鼻支原体的抗体PD4检测人类肿瘤组织标本中的感染情况，发现在胃癌、结肠癌、食管癌、肺癌和乳腺癌的病人样本中，感染率为39％-55％，利用PCR进行检测也发现，在59.3％的卵巢癌、52％的前列腺癌中也发现有猪鼻支原体感染，另一项研究显示，发现89％的在肝癌病患的CTC循环肿瘤细胞中有猪鼻支原体感染，并且已感染者的预后生存期短于未感染者。目前在临床工作中暂未将支原体检测列为肿瘤筛查的诊断项目，更多的支原体检测应用于体外细胞培养之中，在治疗方面，多利用抗生素进行治疗，但抗生素的耐药性目前已非常普遍，并且对真核细胞仍旧会产生一定的副作用和毒性，缺乏特异性、对人体内正常菌群的杀伤也是其固有缺陷。因此开发新型的可用于体内外的快速检测方法和无毒副作用的治疗方法具有重要意义。

核酸适体既可以作为高灵敏度的分子检测探针，又可以作为一种靶向配体荷载药物进行疾病的治疗，与抗体相比，核酸适配体还具有诸多额外的优势，如合成成本低、稳定性好、易于修饰、无免疫原性，可用于疾病的诊断与治疗，具有较大的学术与应用价值。

发明内容

本发明的主要目的是提供一种新型的与猪鼻支原体高亲和力、高特异性结合的核酸适体及其应用。

该核酸适体特异性强，灵敏度高，能够靶向结合猪鼻支原体、靶向结合猪鼻支原体感染的细胞；作为检测猪鼻支原体感染的试剂、作为检测猪鼻支原体感染细胞的试剂以及作为检测猪鼻支原体感染细胞体内活体成像的试剂。

一种与猪鼻支原体特异性结合的核酸适体，序列如下：

SEQ NO.1:

5’-ACCGACCGTGCTGGACTCACGTCGTCCATTTCCTTGAAAAAGGCACGGGTTCCATGAACTCACTATGAGCGAGCCTGGCG-3’；

或者在SEQ NO.1的3’端区段进行碱基删减获得与其功能相同的核酸适体；

或者在SEQ NO.1的中间区段进行碱基更换获得与其功能相同的核酸适体。

所述的在SEQ NO.1的3’端区段进行碱基删减获得与其功能相同的核酸适体；优选如下序列的核酸适体：

SEQ NO.7:

5’-ACCGACCGTGCTGGACTCACGTCGTCCATTTCCTTGAAAAAGGCACGGGTTCCATGAACTCACTATGAGC-3’。