[发明专利]一种具有DOPA-IGF1表面涂层的纯钛制品及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种具有DOPA-IGF1表面涂层的纯钛制品的制备方法，其特征在于，该方法包括：

将DOPA-IGF1、维生素C和酪氨酸酶混匀后室温孵育2-3h，然后过滤，加入到装有纯钛制品的培养皿中孵育24-30h，得到具有DOPA-IGF1表面涂层的纯钛制品。

2.根据权利要求1所述的一种具有DOPA-IGF1表面涂层的纯钛制品的制备方法，其特征在于，所述的DOPA-IGF1的浓度为20ng/ml，维生素C的浓度为1.67mg/ml。

3.根据权利要求1所述的一种具有DOPA-IGF1表面涂层的纯钛制品的制备方法，其特征在于，所述的纯钛制品在放入培养皿中之前，先将纯钛制品用400-1500目的进口砂纸逐级打磨至光滑无痕，在丙酮中浸泡20-30min，取出后在无水乙醇中浸泡20-30min，再经超声震荡20-30min，高温高压灭菌。

4.根据权利要求1所述的一种具有DOPA-IGF1表面涂层的纯钛制品的制备方法，其特征在于，所述的纯钛制品的直径为1cm，厚度为1mm。

5.根据权利要求1所述的一种具有DOPA-IGF1表面涂层的纯钛制品的制备方法，其特征在于，所述的DOPA-IGF1的制备方法，包括：

(1)在含有100μg氨苄青霉素Amp的100ml LB培养基中加入含有DOPA-IGF1的大肠杆菌BL21菌种，37℃，150次/分摇床培养20h；

(2)将20ml活化的菌液加入到1L YTA/Amp培养基中，Amp浓度为100μg/ml，在37℃下，150次/分摇床培养4-5h，至到OD600＝0.6；

(3)菌种取样保存：500μl菌液加1-2滴甘油加入EP管中混匀，-80℃保存；

(4)诱导前立即取1ml样品，1300rpm，2min离心，去上清，保存在-20℃，冷冻直至SDS-PAGE电泳需要；

(5)加入终浓度为0.2mmol/L的IPTG诱导表达，37℃，150次/分摇床摇匀20h；

(6)取1ml样品，1300rpm，2min离心，去上清，保存在-20℃，冷冻直至SDS-PAGE需要；

(7)将反应体系500ml分装，3800rpm，4℃，离心30min，弃上清，称菌重；

(8)配制Buffer-B缓冲体系，每100mlBuffer-B中含有0.12g Tris、1.56g NaH2PO4·H2O、48g脲，调节PH至8.0；

(9)将细胞沉淀与Buffer-B缓冲液按照1：5的体积比混匀，磁力搅拌1h，至半透明状；

(10)室温下，10000g离心裂解物30min，保存上清；

(11)取上清上Ni-NTA柱子，流速为0.5ml/min；

(12)上完样后，用Wash buffer洗柱子0.5ml/min，待无杂蛋白流出，停止洗涤；

(13)洗涤结束后，用Elution Buffer进行蛋白洗脱，紫外检测蛋白流出后开始留样；

(14)蛋白纯化完成后，用5V Lysis Buffer平衡柱子，加入20％乙醇，在4℃中保存。

6.权利要求1所述的制备方法得到的具有DOPA-IGF1表面涂层的纯钛制品。

7.权利要求6所述的具有DOPA-IGF1表面涂层的纯钛制品作为修复材料在口腔种植体领域的应用。