[发明专利]一种基于肺组织内基因甲基化的肺癌诊断试剂盒

说明书

本发明公开了一种基于肺组织内基因甲基化的肺癌诊断试剂盒，属于肿瘤诊断试剂领域。本发明的试剂盒包括检测CYCS、LOC283585、ZNF316、THEG5、MIR1233‑1、LOC102724050中的任意1～6个基因的甲基化的试剂，可实现肺癌快速诊断，准确性高，应用前景良好。

技术领域

本发明属于肿瘤诊断试剂领域。

背景技术

肺癌是发病率和死亡率增长最快，对人群健康和生命威胁最大的恶性肿瘤之一。近50年来许多国家都报道肺癌的发病率和死亡率均明显增高，男性肺癌发病率和死亡率均占所有恶性肿瘤的第一位，女性发病率占第二位，死亡率占第二位。

对肺癌患病风险进行提前预测，以及早期筛查，对肺癌的预后改善具有重大意义。通过肿瘤标志物，可快速、便捷地实现肺癌患病风险预测和早期筛查。经过人们长期研究，已有众多的肺癌标志物，主要有如下几种类型：(1)自身抗体；(2)自身抗体以外的其他蛋白；(3)代谢物；(4)RNA；(5)序列改变的DNA；(6)不同程度甲基化的DNA。每种类型下的标志物数量众多。

由于被检者的个体差异，依赖现有的标志物组合进行预测与筛查仍存在不小比例的假阳性和假阴性，准确度不够高。

CYCS(cytochrome c,somatic；Gene ID:54205)编码一种小的血红素蛋白，作为线粒体电子传递链的中心成分。LOC283585是一个功能尚不明确的非编码RNA的基因。UCSCgenome browser(http://genome-euro.ucsc.edu/index.html)相关数据显示，该基因仅在睾丸中有很微量(仅0.27RPKM)的表达。另有研究报道该基因的非编码RNA产物可能与结直肠癌的预后有关(Int.J.Mol.Sci.2016,17,598；doi:10.3390/ijms17040598)。ZNF316(zinc finger protein 316；Gene ID:100131017)基因是一种锌指蛋白编码基因，广泛表达于各种器官，但其功能尚未被研究。THEG5(testis highly expressed protein 5；GeneID:100507527)是一种特异性表达于睾丸的基因，目前未见其与肺癌关系的报道。MIR1233-1(有时也写成“MIR1233”；Gene ID:100315375)是一种编码miRNA的基因，目前已被报道其表达产物miR-1233(MIMAT0012789)与肾细胞癌死亡率和胃癌患病风险相关，其中miR-1233表达量越高，肾细胞癌死亡率越高，而胃癌患病风险则越低。目前尚未见有关miR-1233与肺癌关系的报道。LOC102724050(Gene ID:102724050)不编码蛋白，广泛表达于阑尾等多种器官，但功能未明，与肺癌的关系也尚不清楚。

前述6个基因的甲基化情况与肺癌之间的关系均未见报道。

发明内容

本发明要解决的问题是：提供一种新的基于肺组织内基因甲基化的肺癌诊断试剂盒。

本发明的技术方案如下：

检测肺组织内基因的甲基化水平的试剂在制备肺癌诊断试剂中的用途，所述基因为：CYCS、LOC283585、ZNF316、THEG5、MIR1233-1、LOC102724050中的1～6个。

进一步地，所述试剂是甲基化测序试剂，包括重亚硫酸盐试剂、测序建库试剂和PCR扩增试剂。

进一步地，所述PCR扩增试剂包括引物对，引物对序列依次如SEQ ID NO.1～12所示。

进一步地，所述试剂为甲基化特异性PCR试剂、甲基化敏感性单核苷酸引物延伸试剂、甲基化敏感性单链构象分析试剂或甲基化敏感性变性梯度凝胶电泳试剂。

一种肺癌诊断试剂盒，所述试剂盒包括检测肺组织内基因CYCS、LOC283585、ZNF316、THEG5、MIR1233-1、LOC102724050中的任意1～6个的甲基化水平的试剂。