[发明专利]共同检测流行性出血病病毒和帕利亚姆血清群病毒的RPA-LFD引物、探针及试剂盒

权利要求书

1.共同检测流行性出血病病毒和帕利亚姆血清群病毒的RPA-LFD引物和探针，其特征在于：

引物包括EHDV的RPA-LFD检测引物和PALV的RPA-LFD检测引物；

EHDV的RPA-LFD检测引物，包括上游引物EHDV_F和下游引物EHDV_R，核苷酸序列如下：

上游引物EHDV_F：tggattgcctgttttacatgattcaacttggga；（SEQ ID NO.1）；

下游引物EHDV_R：Bio-taacgcttgacgaacgatgacataactttcacccctaaac；（SEQ IDNO.2）；

PALV的RPA-LFD检测引物，包括上游引物PALV_F和下游引物PALV_R，核苷酸序列如下：

上游引物PALV_F：tactaaaatttcaagagggttttctcataaattgg；（SEQ ID NO.3）；

下游引物PALV_R：Bio-ggtcataactatattaagcgattcataataagcccc；（SEQ ID NO.4）；

与所述引物配合使用的探针为nfo探针，其核苷酸序列分别为：

EHDV_Probe：DIG-tttattgaacaaagagcgaagaacgaaatg[THF]aaatatatggagaca[C3-spacer]；（SEQ ID NO.5）；

PALV_Probe：FITC-tgaggatggttttactatgtatttaattcg[THF]gatccattgtgtgct[C3-spacer]；（SEQ ID NO.6）。

2.含有权利要求1所述引物和探针的试剂盒。

3.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，还包括：阴性对照模板、阳性对照模板、反转录试剂、扩增试剂和PCRD Nucleic Acid Detector。

4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述的阴性对照模板为RNase-free水；所述的阳性对照模板为EHDV Seg-1 DNA片段和PALV Seg-1 DNA片段。

5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述的阳性对照模板的拷贝数为：EHDVSeg-1 DNA片段 7.1×10¹³拷贝/μL，PALV Seg-1 DNA片段 6.8×10¹³拷贝/μL。

6.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，反转录试剂包括5×PrimeScript RTMaster Mix和RNase-free水。

7.如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒的反转录体系为：5×PrimeScript RT Master Mix，2.0 μL；

总RNA，5.0 μL；

RNase-free水，3.0 μL；

总计10.0 μL；

反转录程序为：反转录37 ℃，15 min，共1个循环；反转录酶的失活85 ℃，5 s，共1个循环。