[发明专利]一种风湿病患者细胞因子流式检测的样本前处理及保存方法

说明书

本发明提供了一种风湿病患者细胞因子流式检测的样本前处理及保存方法，和一种用于判断自身免疫性疾病类型，诊断自身免疫性疾病(例如风湿病的)诊断试剂盒。具体地，本发明提供的方法和试剂盒对于提高风湿病患者基于流式细胞术进行细胞因子检测结果的稳定性及准确性具有临床意义。此外，本发明依据风湿病病人体内细胞因子表达的特殊性所建立的方法，检测结果准确且重复性好，易于临床推广和应用。

技术领域

本发明涉及医学检验领域，具体地，涉及一种风湿病患者细胞因子流式检测的样本前处理及保存方法，和用于诊断风湿病的试剂盒。

背景技术

细胞因子(cytokine)是一类由各种免疫细胞和非免疫细胞产生的具有生物活性的多肽或糖蛋白。通常所说的细胞因子包括淋巴细胞因子、单核细胞因子及其他细胞产生的细胞因子。细胞因子种类繁多，其生物学活性也复杂多样，对有关它们在机体正常状态的维持和不同疾病发生中的作用的研究报道也越来越多。随着分子生物学等相关学科的迅速发展，各种细胞因子的检测手段相继被构建。

流式细胞仪技术(flow cytometry,FCM)，是应用流式细胞仪，结合单克隆抗体技术、免疫荧光染色技术，对快速流动液体中的单细胞进行多种参数测量和分析，检测速度快、精确性高。用流式细胞仪对多重细胞因子进行定量检测的方法，能够同时对样本中的多个指标进行定性、定量检测。已经在我国广泛应用。但由于各厂家试剂，尤其是在特殊的风湿病患者领域内并未确立的相应的标准化操作流程。为了使实验结果更加真实反应患者体内的情况，制定一套标准化的操作流程对于流式法进行细胞因子检测是至关重要的。

自身免疫性疾病的发病机制很复杂，但自身反应性T细胞、B细胞的激活，是自身免疫性疾病发病过程中一个必然的环节。因而，许多学者将自身免疫性疾病分为三大类：T细胞介导的、自身抗体介导的、及联合介导的自身免疫性疾病。B细胞激活后的重要产物——自身抗体已作为诊断自身免疫性疾病的标志物，而目前还没有常规检测自身反应性T细胞的特异性指标，这导致难以准确判断自身免疫性疾病是否是T细胞介导的自身免疫性疾病，还是联合介导的自身免疫性疾病。

T细胞产生的细胞因子的检测在一定程度反映了T细胞的活化程度。多种细胞因子的联合检测可反映不同辅助性T细胞(Th)亚群的活化。由于风湿病患者体内T细胞活性的不确定性，分泌到血清或血浆中的这些细胞因子不仅含量低，而且不容易检测。

因此，建立一种能够准确检测由自身反应性T细胞介导的自身免疫性疾病的检测方法至关重要。

发明内容

本发明的目的在于提供一种风湿病患者细胞因子流式检测的样本前处理及保存方法。

本发明的第一方面，提供了一种诊断试剂盒，所述试剂盒包括：

(a)用于采血的采血管，所述采血管为带有分离胶且含有促凝剂的采血管；

(b)用于检测细胞因子的检测试剂，所述细胞因子选自下组：IL-8、IL-17A、TNF-β、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-12p70、IL-17F、IL-22、TNF-α、IFN-γ、或其组合；

所述试剂盒用于判断自身免疫性疾病是否是T细胞介导的自身免疫性疾病，或者是否是T细胞和自身抗体联合介导的自身免疫性疾病。

在另一优选例中，所述细胞因子至少包括IL-8、IL-17A、TNF-β、或其组合。

在另一优选例中，所述试剂盒还包含标签或说明书，所述标签或说明书注明：所述试剂盒用于判断自身免疫性疾病是否是T细胞介导的自身免疫性疾病，或者是否是T细胞和自身抗体联合介导的自身免疫性疾病。

本发明的第二方面，提供了一种样本检测前处理方法，所述方法包括以下步骤：

(a)提供一带有分离胶的采血管；

(b)使用所述带有分离胶的采血管采集血液样本；