[发明专利]一种用于卵巢癌早期诊断及预后评估的检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种卵巢癌生物标记物紧密连接蛋白3(CLDN3)酶联免疫检测试剂盒，其特征在于它由CLDN3标准品、多克隆抗体包被板、辣根过氧化物酶(HRP)标记多克隆抗体，质控品和辅助试剂组成，可用于卵巢肿瘤的良、恶性鉴别诊断，尤以是卵巢癌的早期诊断和卵巢癌术后化疗效果监测及预后评估。

技术领域

本发明涉及医学检测技术领域，具体涉及一种用于卵巢癌早期诊断及预后评估的特异蛋白酶联免疫检测试剂盒。

背景技术

卵巢癌在女性生殖系统恶性肿瘤中发病率居第三位，而死亡率却位居首位，近年来其发病率还呈现出逐年上升的流行特征。卵巢癌发病隐匿，70％的患者确诊时已为晚期，卵巢癌已成为严重威胁女性健康的常见恶性肿瘤。因卵巢癌具有死亡率高和复发率高的特点，因此积极发现客观、可靠的科学指标，尽早发现、诊断以及治疗卵巢癌对提高卵巢癌患者的生存质量意义重大，也是卵巢癌研究的重点和难点。生物标志物检测在卵巢癌的早期诊断、良恶性鉴别诊断以及预后评估中的作用不可忽视，研究针对卵巢癌的特异性生物标志物对卵巢癌的诊断及预后具有重要意义。

体外肿瘤生物标志物检测成为最便捷、有效的诊断方法，可通过酶联免疫吸附试验对患者血清中的生物标志物水平进行检测，有效反应机体内肿瘤生物标志物水平的异常分泌情况，从而为卵巢癌的早期诊断提供重要依据。虽然临床研究中发现一些肿瘤生物标记物，如糖类抗原125(CA125)、癌胚抗原(CEA)、人附睾蛋白4(HE4)等，给临床卵巢癌的诊断和预后评估带来一定的应用价值，但上述指标的检测存在敏感度低以及特异性差的缺陷。紧密连接蛋白3(CLDN3)作为卵巢癌的一种肿瘤生物标记物，与肿瘤细胞增殖率的提高有关，其在卵巢癌患者中过度表达，且与患者的不良预后有关。本研究中结果显示，卵巢癌组织中CLDN3的表达率为93.2％，且CLDN3表达阳性率随临床分期的增加而提高，表明CLDN3与卵巢癌的发生发展具有密切的相关性，同期随访数据表明，CLDN3表达阴性的生存率显著优于表达阳性的患者，且多因素分析显示，CLDN3是预测上皮性卵巢癌生存的独立预后因素，CLDN3表达阳性患者预后不良，进一步，CLDN3对卵巢癌细胞的侵袭和迁移的影响进行检测，结果表明，CLDN3对卵巢癌的侵袭、迁移以及增殖具有显著的促进作用。正常情况下，当癌细胞在扩散大10E+5级以上时，在末梢血液中即可检出CLDN3，一般认为与人体肿瘤癌前病变过程有关，提示单独采用CLDN3检测可作为卵巢癌中重要的指标之一。因此，以CLDN3为生物标志物对卵巢癌的早期诊断及预后评估进行检测具有可行性。

本发明提供了一种卵巢癌生物标记物蛋白紧密连接蛋白3(CLDN3)检测试剂盒，可用于卵巢肿瘤的良、恶性鉴别诊断，尤以是卵巢癌的早期诊断和卵巢癌术后化疗效果监测及预后评估。

发明内容

首先，本发明提供了一种卵巢癌生物标记物紧密连接蛋白3(CLDN3)酶联免疫检测试剂盒，该试剂盒具体包括：CLDN3标准品A-F、多克隆抗体包被板、辣根过氧化物酶(HRP)标记多克隆抗体，质控品(阳性对照和阴性对照)和辅助试剂；

具体地，CLDN3检测试剂盒具体包括：ELISA酶标板、冻干标准品A-F、阳性对照、阴性对照、HRP标记的CLDN3多克隆抗体、浓缩洗涤液(25x)、底物反应液(TMB)、反应终止液、封板膜；

具体地，本发明试剂盒的CLDN3标准品A-F提取自人血浆，其中HIV、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、梅毒检测均为阴性，标准品A、B、C、D、E、F中抗CLDN3抗体浓度分别为调至100±10ng/ml，50±10ng/ml，25±2.5ng/ml，12.5±1.2ng/ml，6.25±0.6ng/ml，3.125±0.3ng/ml，将所获得的6份血清按每个试剂盒的需要量分装，冷冻干燥，即制备成梯度浓度CLDN3标准品；

具体地，本发明试剂盒中的多克隆抗体包被板可用CLDN3纯品对Balb/c小鼠免疫获得的多克隆抗体包被酶标板制作而成，具体步骤如下：