[发明专利]一种小而密低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒及其检测方法

说明书

本发明公开了一种小而密低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒及其检测方法，所述试剂盒，包括试剂A和试剂B；所述试剂A包括胆固醇脂酶、胆固醇氧化酶、磷脂酶、过氧化物酶、色相、缓冲液、表面活性剂和增强剂；所述试剂B包括曲拉通X‑100、4‑氨基安替比林、过氧化物酶、缓冲液和增强剂；所述增强剂包括达瓦树胶、十二烷基二甲基甜菜碱和棉子糖。所述检测方法为两点终点法，反应方向为升反应，检测主波长为600nm，副波长为700nm，反应温度为37℃，时间为10min。本发明在提高试剂盒检测结果的准确度的同时，提高了试剂盒的稳定性，简化了储存条件，避免了医疗资源的浪费，同时，本发明各组分价格适中，更适合临床的推广应用。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种小而密低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒及其检测方法。

背景技术

血液中的脂蛋白可以根据其密度大小分为高密度脂蛋白(HDL)，低密度脂蛋白(LDL)，极低密度脂蛋白(VLDL)和乳糜微粒(CM)四大类。不同种类的脂蛋白胆固醇对于引起动脉粥样硬化的能力不一样。通常临床上检测最多的组分是高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)，低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)，就常规而言，高密度脂蛋白胆固醇对于动脉血管有一定的保护作用，其含量高发生心血管疾病的风险就低，低密度脂蛋白胆固醇则易引起动脉粥样硬化，增大发生心血管疾病的风险。然而，最近的研究表面，即使LDL-C的含量较低，有部分人群也容易发生心血管疾病，而部分LDL-C含量较高的人群却不一定会发生心血管疾病。这可能与LDL-C的不均一性有关，有研究显示，低密度脂蛋白的亚组分中颗粒较小密度较大的LDL称为小而密低密度脂蛋白(smalldenseLow-DensityLipoprotein，简称sdLDL)；而将颗粒较大、密度较低的LDL称为大而轻LDL。相比之下，sdLDL致动脉粥样硬化的能力更强，是目前公认的引发心血管疾病的重要危险因子之一。

目前针对小而密低密度脂蛋白胆固醇的测定方法主要有核磁共振光谱法、分子筛色谱法、电子显微镜技术、动态光散射法、微流控芯片毛细管电泳法。其中常用的有：(1)密度梯度超速离心法，是一种扩展型脂质特征测定产品，可报告22种血液胆固醇成分(包括对非空腹LDL亚型及脂蛋白所有子类的直接测定)，是目前国际上小而密低密度脂蛋白胆固醇测定的参考方法。(2)管式凝胶电泳：采用管式聚丙烯酰氨凝胶电泳原理，可完全分离鉴定所有脂蛋白(含7种LDL亚型，10种HDL亚型)。但上述两种检测方法均需要特殊实验设备，并且耗时久，操作复杂，并不适合临床常规检测。(3)过氧化物酶法：在国际上，日本电化生研公司最先推出了适用于临床常规开展的均相酶法，在中国与九强生物和生研技术合作，开发出了过氧化物酶法检测sd LDL-C的方法，在所有临床实验室应用当前设备都可以进行检测，也使得小而密低密度脂蛋白胆固醇作为冠心病的一个标志物将可能具有更广泛的临床实用性。

但是目前已有的低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒普遍存在检测准确度不高的问题，同时，有效期时间短，开瓶稳定性差，这极大地造成了医疗资源的浪费。

CN110564810A公开了一种高性能小而密低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒，其原料按重量分包括：试剂A：Good’s缓冲液90-110mmol/L、胆固醇酯酶1-3ku/L、胆固醇氧化酶1-2ku/L、磷脂酶0.7-0.9ku/L、过氧化氢酶400-600ku/L和N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐(TOOS)1-3mmol/L；试剂B：Good’s缓冲液90-110mmol/L、过氧化物酶2-3ku/L、4-氨基安替比林3-5mmol/L和叠氮钠0.04％-0.06％，该发明使用叠氮钠作为防腐剂会对胆固醇酯酶产生一定程度的抑制作用，因此影响测定的准确度。