[发明专利]一种核酸抗体联合检测致病菌的试剂盒

说明书

本发明公开了一种核酸抗体联合检测致病菌的试剂盒。本发明筛选获得特异性识别幽门螺旋杆菌单克隆抗体，将所述单克隆抗体标记量子点和其他抗体标记的硝酸纤维素膜制备获得抗体荧光量子点快速检测试纸，同时针对幽门螺旋杆菌DNA序列进行分析，选取保守区设计RPA引物和探针，并制备成为相应的检测试纸条；将两个检测方法进行组合使用，能够进一步提高检测的准确性，从而及早诊断，利于患者尽快治疗，适于大规模推广使用。

技术领域

本发明涉及生物检测领域,并且更具体地涉及一种核酸抗体联合检测致病菌的试剂盒。

背景技术

幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori，H.pylori)于1983年由澳大利亚学者Warren和Marshall从慢性胃炎患者胃粘膜中成功分离出。H.pylori是一种革兰氏阴性螺旋状杆菌，在胃上皮细胞定居繁殖。大量研究证实，H.pylori是慢性胃炎、消化性溃疡及胃肠道淋巴瘤的主要致病因素，并与胃癌发生密切相关。1994年国际癌症研究中心(IARC)将H.pylori列为I类致癌因子。目前，H.pylori的感染率在发达国达到30％～50％，在发展中国家则高达80％，而我国20岁以上的成年人感染率也达到32％～75％。

幽门螺旋杆菌的诊断方法可划分为侵入性方法和非侵入性方法，其中侵入性方法包括细菌培养、快速脲酶试验和组织学检测等；这些方法具有足够的敏感性和特异性，但成本高，需要专业人员操作，还可能引起患者不适，不利于临床应用，更不适用于大批量检测。非侵入方法包括呼吸实验(UBT)、粪便抗原检测和血清学试验等；非侵入性方法不需借助胃镜检查、患者依从性较好，因而具有临床实际意义，但易受感染，出现假阳性。此外，基因检测技术即不受临床治疗用药的干扰，又可检测有无H.pylori的感染，同时也能检测细菌的基因型；基因诊断技术同样可以直接用于胃液、唾液、粪便等标本的检测，具有较高的可信度，在疾病诊断方面得到了广泛应用。但幽门螺旋杆菌的DNA突变性非常高，存在大量的变异，具有高度不一致性，很容易造成假阴性的结果。因此，现有方法的临床敏感性不是十分理想。

发明内容

为了更好规避以上缺陷,为患者提供尽早、准确的诊断结果，提供了一种制备简单、成本低廉、使用方便、不需要高精尖仪器、更为准确、高效的检测试剂盒。所述试剂盒通过核酸-抗体双重检测方法对幽门螺旋杆菌进行检测，能更有效检测幽门螺旋杆菌,从而及早诊断，利于患者尽快治疗。

本发明提供以下技术方案：

本发明提供一种特异性结合幽门螺旋杆菌的单克隆抗体8D7，其包含重链可变区和轻链可变区，该重链可变区含有CDR1区、CDR2区和CDR3区，重链CDR1区、CDR2区和CDR3区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1、2和3所示；该轻链可变区含有CDR1区、CDR2区和CDR3区，其中轻链CDR1区、CDR2区和CDR3区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:4、5和6所示。

另一方面，本发明提供一种特异性结合幽门螺旋杆菌的单克隆抗体8D7，其包含重链可变区和轻链可变区，其中重链可变区包含氨基酸序列SEQ ID NO:7，轻链可变区包含氨基酸序列SEQ ID NO:8。

在一些实施方案中，本发明所述的抗幽门螺旋杆菌抗体包含两条重链和两条轻链，或由两条重链和两条轻链构成，其中各重链包含上述的重链恒定区序列、重链可变区序列或CDR序列，且各轻链包含上述的轻链恒定区序列、轻链可变区序列或CDR序列。本发明的抗体可以是全长抗体，所述全长抗体包含恒定区，所述全长抗体轻链恒定区进一步包含鼠源κ、λ链序列。所述全长抗体重链恒定区进一步包含鼠源IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3、IgA或IgM序列。

在一些实施方式中，本发明的抗幽门螺旋杆菌抗体是由上述的抗幽门螺旋杆菌抗体或抗体片段形成的Fab片段、Fab'片段、F(ab')2片段、Fv片段、双抗体、线性抗体、单链抗体分子或多特异性抗体。

本发明另外提供一种幽门螺旋杆菌荧光量子点快速检测试纸，其中将8D7单克隆抗体标记量子点配制备而成。